摘要：目的建立检测肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)23S rRNA V区2063基因型的反向斑点杂交方法,并与PCR产物直接测序法的结果进行比较分析。方法19例自临床咽拭子标本分离培养的MP,用自行设计的反向斑点杂交法检测23S rRNA V区2063基因型,同时对相应序列测序分析。抽提标准菌株FH和127份经PCR测定MP阳性的临床标本基因组DNA,用MP阴性的基因组DNA抽提物5份作阴性对照,用反向斑点杂交法检测23S rRNA V区2063基因型。结果19例分离培养的MP,经反向斑点杂交法检测15株有23S rRNA V区基因A2063G位点突变;4株为2063A,与测序结果一致(Kappa一致性检验,P>0.05)。经反向斑点杂交法检测,127份MP阳性的基因组DNA抽提物中有122份标本为A2063G位点突变,标准菌株FH和2份DNA抽提物的2063位点碱基为A,还有3份抽提物标本的2063位点碱基既有A又有G,5份阴性对照均无显色。结论反向斑点杂交方法能快速、准确检测临床MP 23S rRNA V区2063基因型。

摘要：目的:用PCR产物直接测序法和反向斑点杂交方法检测肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)23S rRNA V区2063基因,结果进行比较分析。方法:19例自临床咽拭子标本分离培养的MP,用自行设计的反向斑点杂交法检测23S rRNA V区2063基因型,同时对相应序列测序分析。结果:19例分离培养的MP,经反向斑点杂交法检测15株有23S rRNA V区基因A2063G位点突变;4株为2063A,与测序结果一致(Kappa一致性检验,P>0.05)。结论:反向斑点杂交方法能快速、准确检测临床MP 23S rRNA V区2063基因型。

摘要：目的制备抗结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶蛋白6(ESAT-6)单克隆抗体,以应用于多种检测技术和临床研究。方法设计并合成结核分枝杆菌ESAT-6特定抗原肽序列,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测、多次有限稀释亚克隆建立能稳定分泌抗结核分枝杆菌特异抗原肽单克隆抗体的杂交瘤细胞系,纯化后行免疫球蛋白亚型分析,并鉴定分析该单克隆抗体在蛋白质免疫印迹法、免疫沉淀法和酶联免疫法(ELISA)检测中的应用效果。收集结核分枝杆菌培养上清液样本38份,非结核分枝杆菌培养上清液样本20份,结核性胸水样本32份,非结核性胸水样本24份以及健康对照血清样本20份。结果单克隆抗体免疫球蛋白亚型分析显示抗体类型为IgM、κ型,并可应用于Western blotting和免疫沉淀法。ELISA定量检测显示该特异性抗体检测结核分枝杆菌的敏感度为95.7%(67/70),特异度为100%(64/64)。结论 ESAT-6单克隆抗体用于结核分枝杆菌检测有较高的敏感性和特异性,可用于结核病的早期诊断。

摘要：目的探讨双重荧光实时聚合酶链反应(real-time PCR)在肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)对大环内酯类抗生素耐药基因检测中的应用。方法19例自临床咽拭子样品分离培养的肺炎支原体及标准菌株,FH,进行体外药物敏感试验,并用自行设计的双重荧光Real-time PCR检测大环内酯类抗生素耐药基因型,同时对相应序列测序分析。抽提127份经PCR测定MP阳性的临床样品基因组DNA,用MP阴性的基因组DNA抽提物5份做阴性对照,用Real-time PCR检测大环内酯类抗生素耐药基因型。结果19例分离培养的MP,体外药物敏感试验结果显示15株有耐药,并且都有23S核糖体RNA(rRNA)V区基因A2063G位点突变;而4株对大环内酯类抗生素敏感的MP基因型为23S rRNA V区基因2063A;测序结果证实Real-time PCR结果。127份MP阳性的基因组DNA抽提物,5份用MP阴性的基因组DNA抽提物,经Real-time PCR检测,其中122份样品为MP 23S rRNA V区基因A2063G位点突变,2份样品的2063位点碱基为A,还有3份样品的2063位点碱基既有A又有G。127份MP阳性的样品在Real-timePCR检测中未见到2条荧光曲线都不生长的情况。5份阴性对照2条荧光曲线都不生长。结论双重荧光Real-timePCR能为临床快速、准确检测MP对大环内酯类抗生素耐药的基因型。

摘要：目的 制备抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP-10)特定抗原肽的单克隆抗体,为建立结核病临床早期诊断的免疫学方法奠定物质基础.方法 设计并合成结核分枝杆菌CFP-10第53 ～ 66位氨基酸(14肽AAVVRFQEAANKQK)作为特定的抗原肽序列,经免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测、多次有限稀释亚克隆建立能稳定分泌抗结核分枝杆菌特异抗原肽单克隆抗体的杂交瘤细胞系,纯化该单克隆抗体,进行免疫球蛋白亚型分析,并鉴定分析该单克隆抗体在蛋白质免疫印迹法(Western blotting)、免疫沉淀法和ELISA检测中的应用效果.共检测结核分枝杆菌培养上清样本38份,非结核分枝杆菌培养上清样本20份,结核性胸水样本32份,非结核性胸水样本24份以及健康对照血清样本20份.结果 单克隆抗体免疫球蛋白亚型分析显示该杂交瘤细胞系产生的抗体类型为IgG1和κ型.该抗结核分枝杆菌CFP-10特异性单克隆抗体可成功用于Western blotting和免疫沉淀法分析.ELISA定量检测显示,该特异性抗体检测结核分枝杆菌的敏感性为78.6％ (55/70),特异性为92.2％ (59/64).结论 CFP-10特定抗原肽单克隆抗体用于结核分枝杆菌检测有较高的敏感性和特异性,可用于结核病的早期诊断.