摘要：以戊型肝炎 (HepatitisE)病人高热期血清为原材料 ,设计特定引物 ,经RT PCR扩增获得开放阅读框 2 (ORF2 ) 1.3kb基因片段 ,用EcoRI和BamHI插入克隆载体 pUC18,测定了该克隆基因片段的核苷酸序列并进行了比较分析。其片段长度为 130 9bp ,其A =2 4 9(19.2 % ) ,G =318(2 4 .2 9% ) ,T =339(2 5.9% ) ,C =4 0 3(30 .79% ) ;与印度株和缅甸株的同源性在 92 %以上 ,而与乍得和墨西哥株的同源性分别为 90 .7%和 77.4 %。

摘要：用ＨＢｓＡｇＲＰＨＡ做为模式，选用羊、火鸡、鹅、人Ｏ型血球为载体，醛化后分成致敏和不致敏两种，与异嗜性抗体、中国生物制品药品检定所的参比品等作凝集试验。结果表明，无论特异性还是灵敏度都以人Ｏ型血球为最佳。在此基础上，设计了五种醛化方法处理人Ｏ型血球，共得出１８个醛化样品，经７３种不同的比较试验，筛选出最佳醛化方法为改良丙酮醛──甲醛法，采用该法醛化后血球为褐色，阴性血清和空白对照背景清晰，血球沉集点致密，下滑程度好。致敏抗—ＨＢｓＭｃＡｂ后，使ＨＢｓＡｇ灵敏度达到１～２ｎｇ／ｍｌ。为制备高质量的血凝试剂提供了最佳载体。

摘要：设计了一种灵敏的ELISA间接法检测兔抗多杀性巴氏杆菌抗体。在该系统中,从多杀性巴氏杆菌P-1059、x-73或A-898中抽提的可溶性物质作为包被抗原,过氧化物酶标记的绵羊抗兔IgG作为指示物。用本方法和被动血凝试验CPHA)同时检测了78份外观正常兔血清标本,以阻断-抑制试验作为确证试验。结果表明,多杀性巴氏杆菌感染率约为10％左右,以3:A型为主。与PHA法相比,ELISA法有相当高的灵敏度和准确性,且实验步骤简单、快速,既可用于大批量检测兔血清标本,又可用于多杀性巴氏杆菌疫苗的免疫效果评价。

摘要：设计了一种灵敏的ＥＭＩＳＡ竟争抑制法，用以检测实验动物多杀性巴氏杆菌。在该系统中，从多杀性巴氏杆菌Ｐ－１０５９、Ｘ－７３和Ａ－８９８中抽提可溶性物质作为包板抗原。用３株全菌体免疫兔，提纯兔抗多杀性巴氏杆菌ＩｇＧ，用辣根过氧化物酶标记兔抗多杀性巴氏杆菌ＩｇＧ，将酶结合物与待检动物血清做ＥＬＩＳＡ竞争抑制试验。同时用常规ＥＬＩＳＡ间接法做验证实验。结果表明此法准确可靠，可用于各种实验动物的多杀性巴氏杆菌的检测。对小鼠、仓鼠、兔的检测表明，兔的Ｐ－１０５９阳性率达３０％，小鼠、仓鼠未见阳性。

摘要：目的构建一种新型人肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）分子，测定其蛋白表达和生物学活性。方法在详细分析ＴＮＦα结构及其结构与功能关系的基础上，设计并人工合成了一对ＴＮＦα结构基因点突变引物。应用ＰＣＲ分子克隆技术构建了一种新型ＴＮＦα分子的编码基因，将该编码基因插入表达质粒，转化大肠杆菌，通过温度诱导获得了表达蛋白，对表达产物进行免疫学检测和生物活性检测。结果新构建的突变体ＴＮＦαΝ１与ＴＮＦαＥＬＩＳＡ试剂盒有免疫学反应，其含量为０．５μｇ／ｍｌ；在体外有生物学活性，为１０７ＢＵ／ｍｌ，比活为２．１×１０５ＢＵ／ｍｇ；理化性质与天然原型ＴＮＦα有所不同。结论得到了一种具有生物学活性的新型ＴＮＦα分子。

摘要：在详细分析ＴＮＦα结构及有关ＴＮＦα结构与功能关系研究的基础上，设计并人工合成了一对ＴＮＦα结构基因点突变引物。应用ＰＣＲ和分子克隆技术构建了一种新型人肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）分子的编码基因，将该编码基因插入表达质粒，转化大肠杆菌，通过温度诱导获得了表达蛋白，对突变体克隆进行了ＤＮＡ电泳、酶切位点检测以及基因序列测定，并对突变体蛋白进行了ＳＤＳＰＡＧＥ电泳检测。

摘要：目的建立检测Ⅱ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus 2,HSV-2)DNA拷贝的real-time qPCR方法。方法设计靶向HSV-2 g D片段的特异性引物和探针,以HSV-2基因组为模板,建立检测HSV-2 DNA拷贝的real-time qPCR方法,并进行重复性和灵敏度验证。结果 HSV-2 DNA拷贝在1×10~7~1×10~2 copies/ml范围内,线性良好,r^2>99%,灵敏度为1×10~2 copies/ml;不同稀释度参考品检测结果的批间变异系数为1.70%~5.35%,批内变异系数为1.70%~4.8%。结论与常规的以质粒为模板的real-time qPCR方法相比,以HSV-2基因组为模板建立的realtime qPCR方法的灵敏度更高,可用于生殖器疱疹临床诊断的优化。

摘要：目的研制安全有效的肠道病毒71型(enterovirus 71,EV-A71)灭活疫苗,预防EV-A71感染所致疾病.方法通过比较不同临床EV-A71分离毒株免疫家兔后的免疫原性和细胞传代适应性,筛选EV-A71灭活疫苗生产毒株;建立多步层析纯化工艺,获得高纯度、高比活EV-A71抗原;采用随机双盲、多中心、试验疫苗与安慰剂对照优效性设计方案,在6~35月龄健康婴幼儿中接种2剂、3个批次EV-A71疫苗,观察对照组和疫苗组EV-A71及其他肠道病毒感染所致疾病发生病例数,计算疫苗保护效果.分析疫苗免疫原性、批间一致性和交叉免疫原性.结果依据中和抗体水平将087株确定为疫苗生产株.经超滤浓缩、柱层析纯化后,疫苗抗原目的蛋白纯度达95%以上、比活达800U/μg以上.第一年内疫苗对EV-A71所致住院/重症病例保护率为100.00%、对EV-A71所致手足口病保护率为90.93%、对EV-A71感染所致疾病保护率为81.85%;两年内对EV-A71感染所致手足口样疾病、手足口病的保护率达到95.00%,对EV-A71感染所致疱疹性咽峡炎、疱疹性口腔炎保护率达100.00%,对EV-A71感染所致住院/重症病例保护率达100.00%;但对CV-A16及除EV-A71、CV-A16外其他肠道病毒所致疾病未显现出明显的交叉保护作用.免疫前中和抗体阴性人群,EV-A71疫苗免疫后第56天,EV-A71中和抗体阳转率达到91.7%以上,中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)达到325.3.3批次试验疫苗接种人群间首针免疫后第56天GMT比值的95%可信区间均在等效区间0.67~1.5内,提示3个批次试验疫苗具有较好的一致性.结论EV-A71疫苗对EV-A71感染所致疾病具有较好的保护效果.