摘要：根据GenBank发表的XJ-MSA-2c核苷酸序列(登录号:EU328267)设计的2对特异性引物MS-1、MS-2、MS-3以及MS-4,建立牛巴贝斯虫病巢式PCR快速检测方法。在特异性检测试验中,仅从MSA-2c质粒样本中扩增出622、350bp2条目的片段,与预期片段大小相符,而作为对照样本的双芽巴贝斯虫、牛环形泰勒虫、东方巴贝斯虫基因组DNA均无此扩增目的条带出现。第1次和第2次扩增的敏感性分别为1.75、1.75×10-2μg/L。在对46份全血的DNA样本巢式PCR和显微镜检测中,阳性检出率分别为34.8%(16/46)和23.9%(11/46)。结果表明,所建立的巢式PCR方法准确、敏感、特异,作为牛巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查,具有重要的临床意义。

摘要：【目的与方法】根据Genbank上登陆的双芽巴贝斯虫HSP20基因设计两对引物,SHSP-P1与SHSP-P2和SHSP-P3与SHSP-P4,以其建立牛双芽巴贝斯虫巢式PCR快速检测方法。【结果】第一次、第二次扩增的退火温度均为57℃,分别扩增出约631和409 bp的条带,与预期的大小相符,而作为对照样本的牛巴贝斯虫、牛环形泰勒虫基因组DNA均无此扩增目的条带出现。将感染双芽巴贝斯虫的全血基因组DNA做10倍递减稀释到106倍扩增时,巢式PCR还能见到目的条带,其灵敏度相当于4.6 pg/mL全血基因组DNA。在对50份疫区牛全血DNA样本检测中,阳性检出率分别为22%(11/50)。【结论】所建立的牛双芽巴贝斯虫巢式PCR方法准确、敏感、特异,可以用于牛双芽巴贝斯虫病的快速检测和小范围的流行病学调查,具有重要的临床意义。

摘要：根据GenBank公布的牛巴贝斯虫裂殖子表面抗原MSA-2c基因序列设计引物,采用PCR方法从患病牛的全血基因组中扩增得到798 bp的MSA-2c基因片段,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达MSA-2c基因,取其肝脏提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增可得到目的条带;用重组质粒pcDNA3.1(+)-MSA-2c肌肉注射免疫小白鼠4次后,将获得的抗血清作为抗体,纯化的GST-MSA-2c融合蛋白作为抗原进行Western-blot检测,可得到抗原-抗体结合产生的特异性条带,表明重组质粒具有免疫学活性。

摘要：根据GenBank上发表的环形泰勒虫Tamsl基因序列设计2对巢式引物，成功建立了环形泰勒虫病的巢式PCR快速检测方法。验证试验结果表明，PCR扩增产物测序结果与GenBank收录的Tamsl序列同源性在92％～99％，对环形泰勒虫检测具有良好的特异性、重复性以及灵敏度。对新疆焦虫病疫区牛群血样检测发现，巢式PCR检出率为62．2Yoo（61／98），高于常规PCR检出率（58．2％，57／98）和血涂片镜检检出率（35．7％，35／98），提示该巢式PCR方法可用于大规模的环形泰勒虫病的流行病学调查。