摘要：目的:利用荧光定量PCR技术,建立食品中空肠弯曲菌污染的快速检测方法。方法:以空肠弯曲菌的hipO基因为靶序列,设计引物和探针,优化引物、探针浓度比和Mg2+浓度,对反应体系进行评价。并初步应用于样品的检测。结果:所建反应体系特异性、敏感性和稳定性良好。定量检测低限15cfu/ml。结论:建立了适用于食品中空肠弯曲菌污染快速检测的荧光定量PCR方法。

摘要：目的建立一种快速、准确、特异的实时荧光逆转录聚合酶链反应方法（PCR），以检测人类偏肺病毒。方法根据Hmpv-L基因序列设计引物和探针并对实时荧光PCR反应体系进行优化，提取总RNA，通过随机引物进行反转录反应；产生的eDNA通过实时荧光PCR进行鉴定。进一步评价实时荧光反转录PCR方法的特异性、灵敏度、重复性，对180例临床样本进行检测。结果本实验所建立的实时荧光反转录PCR方法可准确、特异地检测人类偏肺病毒；该方法的灵敏度可达到1拷贝／μl；检测的批间和批内的变异系数均小于5％。180例肺炎和支气管炎患儿痰标本中共检测出28例人类偏肺病毒阳性，阳性率为15．56％（28／180）；肺炎患儿检出率为15．60％（17/109）；支气管炎患儿检出率为15．49％（11／71）。男性患儿检出率18．56％（18／97），女性患儿检出率12．05％（10／83）。患儿年龄小于2岁者检出率22．34％（21／94），2-5岁者检出率8．70％（6／69），大于5岁者检出率5．88％（1/17）。结论本研究建立的人类偏肺病毒实时荧光逆转录PCR方法快速、准确，结果可靠，实用性强；人类偏肺病毒已成为小儿呼吸道感染的重要病原体之一。

摘要：目的建立导流杂交芯片技术检测粪便标本中8种肠道致病菌。方法以细菌16S rDNA和23S rDNA序列设计通用引物和寡核苷酸探针,将活性氨基标记的探针依次固定在BiodyneC膜上,制成检测芯片,用标记生物素的引物进行PCR扩增,将扩增产物与检测芯片在核酸分子快速杂交仪上进行杂交,以POD和TMB进行显色,判断结果;应用该方法检测8种肠道致病菌标准菌株和120份腹泻患者粪便标本,通过细菌培养结果比较该方法的有效性。结果120份临床粪便标本中,采用导流杂交芯片共检出68份(56.67%)携带肠道致病菌;细菌培养鉴定出63份(52.50%)携带肠道致病菌,其中58份导流杂交芯片与细菌培养结果一致,准确率为85.29%。结论导流杂交芯片技术能够快速准确检测8种常见肠道致病菌,而且适用于流行病学调查研究。