摘要：本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,结果表明所扩增2893个核苷酸片段含有CAEV囊膜基因的全序列,编码964个氨基酸。核苷酸和氨基酸序列分析显示,CAEV甘肃株env基因与CAEV-63美国株的env基因核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.1%。

摘要：为建立美洲马传贫毒株和我国弱毒疫苗株鉴别诊断PCR，对接种马传贫阿根廷流行毒株后马4个发热期（23、40、51和70d）外周血单核细胞前病毒DNA gag基因和gP90基因的核苷酸序列进行了监测，经过序列分析发现4个发热期中前病毒gag基因核苷酸序列变化不明显，变异率在1％之内，表明前病毒gag基因在马体内比较保守，可以作为设计鉴别诊断引物的区域；gp90区的基因变化比较大，核苷酸序列变异率在8％～10％之间，通过对几个发热期核苷酸序列推导氨基酸的分析，可以划分出A1、A2、A3和A44个可变区，但其中A1和A4变异都很稳定，在马体发病的整个过程中均只发生1次变异，而A2区第3个发热期变异后，在第4个发热期又回复了突变。对马传染性贫血病毒阿根廷代表毒株前病毒gag和gp90基因核甘酸序列的动念检测结果表明，马传贫病毒在马体整合为前病毒之后比较稳定，这就为建立PCR鉴别诊断方法提供了依据。

摘要：根据GenBank中发表的山羊关节炎脑炎病毒CAEV-CO株(caprine arthritis encephalitis virus-CO,CAEV-CO)的全基因组序列(序列号:NC-001463),设计合成了7对引物,对CAEV甘肃株的全基因组进行了PCR扩增,并对扩增产物进行了克隆和测序。结果表明,CAEV-甘肃株基因组全长为9 186nt。与国际标准毒株CAEV-CO株相比,在编码区有12个碱基的缺失,二者的核苷酸同源性为91.0%;在非编码区有27个核苷酸的插入,核苷酸同源性为97.0%。gag、pol、蛋白Q、tat、env基因编码的氨基酸同源性分别为94.6%、94.7%、87.9%、94.7%和91.5%。

摘要：设计套式引物,内套引物含有BamHⅠ/XhoⅡ酶切位点,采用RT-PCR技术扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)结构蛋白基因ORF2部分片段,长度为634bp,将其克隆于PGEX-T载体,测序结果表明插入的片段属于戊型肝炎病毒ORF2部分,将该片段插入PproEXHTb表达载体,经酶切鉴定证实获得了重组表达质粒。将重组质粒转化大肠杆菌BL21,经1mmol/LIPTG诱导,得到表达,表达蛋白分子量为27Ku,以包涵体形式存在。Westernblot分析表明,该蛋白可以与猪戊型肝炎阳性血清反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。

摘要：目的建立实时定量PCR检测血浆病毒载量的方法,对马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)强毒株攻毒马和疫苗免疫攻毒马血浆中病毒载量进行了跟踪检测,探讨病毒载量和临床疾病状态的相关性.方法以EIAV强毒株LN40序列为标准,在gag保守区设计1对引物和Taqman探针,用于实时定量PCR扩增,用含扩增目的基因的体外转录RNA作标准品,获得标准曲线,对扩增样品进行准确定量.强毒株LN40直接攻毒,或者疫苗株DLV免疫马6个月后用强毒株LN40进行攻毒,跟踪检测攻毒马及免疫攻毒马血浆中EIAV载量情况.结果反应在101～109copies/ml之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/ml.强毒攻毒马出现发热并最终死亡,发热期间马血浆中EIAV载量与体温呈正相关,载量最高达107 copies/ml.免疫攻毒马未出现发热,其血浆EIAV载量的总体水平低于强毒攻毒马,攻毒后3个月低至10 copies/ml以下.结论成功建立了实时定量PCR检测血浆EIAV载量的方法,并证实了用实时荧光定量PCR检测EIAV病毒载量的方法来监测动物感染状态具有可行性,为EIAV致病机制研究和弱毒疫苗免疫保护机制的研究提供良好的技术平台.

摘要：根据已发表的马流感病毒核蛋白基因序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,经反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)成功扩增出了我国马流感病毒 (A/Equine/Qinghai/ 1/ 94 )核蛋白基因 ,将该片段连接到PGEM_T_EASY载体并转化DH5α ,提取阳性菌落的质粒经EcRo1酶切和PCR鉴定其大小为 1.5kb左右 ,对其测序并进行分析发现 ,与A/Equine /Kentucky/2 / 86、A/Equine/Miami/ 1/ 6 3等关系较近 ,同源率为 93.3%～_97.4 % ,而与我国马流感吉林A/Equine/Jilin/ 1/ 89株关系较远 ,同源率仅为 84 .6 %。

摘要：本试验根据已发表的马流感病毒神经氨酸酶 (NA)基因序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,经反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株 (A/Equine/Qinghai/1/94 )NA基因 ,将片段连接到PGEM_T_easy载体并转化DH5α ,提取阳性菌落的质粒经EcRo1酶切和PCR鉴定其大小均为 1.4Kb左右 ,对其测序并构建NA基因进化树。经过比较分析发现 ,我国马流感病毒青海株与A/Equine/Alaska/1/91、A/Equine/Tennessee/5 /86和A/Equine/Algiers/72等关系较近 ,核苷酸同源率为 98.2 %～ 97.4 % ;与我国马流感吉林株 (A/Equine/Jilin/1/89)关系较远 ,核苷酸同源率仅为72 .0 % ;而与H7N7亚型马流感病毒A/Equine/Prague/1/5 6核苷酸同源率仅为 38.0 %。

摘要：根据已发表的马流感病毒血凝素基因序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,经反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)成功扩增出了我国马流感病毒青海株 (A Equine Qinghai 1 94)、吉林株 (A Equine Jilin 1 89)及黑龙江株 (A Equine Heilongjiang 1 89)血凝素基因 ,将片段分别连接到PGEM T easy载体并转化DH5α,提取阳性菌落的质粒经EcRo1酶切和PCR鉴定其大小均为 1 7kb左右 ,对其测序并构建HA基因进化树。经过比较分析 ,青海株与A Equine Kentucky 2 86、A Equine Miami 1 63等关系较近 ,核苷酸同源率为 97 3%～ 84 7% ,而与我国马流感吉林株和黑龙江株关系较远 ,同源率仅为 5 5 2 %。经过比较 ,青海株与我国香港 1

摘要：根据马流感病毒的M基因和HA基因的保守序列,设计了两对引物,MF和MR为通用引物,可以检测出H3N8和H7N7亚型EIV,目的片段227bp,HF和HR为H3N8亚型特异性引物,目的片段595bp。利用这两对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测鉴别H3N8亚型EIV的多重RT-PCR技术。特异性和敏感性试验结果表明,该技术可以用于EIV的快速诊断和亚型鉴定。

摘要：根据Cenbank中发表的山羊关节炎脑炎病毒CAEV-CO株的全基因组序列(序列号:NC-001463),设计合成了7对引物,对CAEV甘肃株的全基因组进行了PER扩增,并对扩增产物进行了克隆和测序。结果表明,CAE-甘肃株基因组全长为9186nt。与国际标准毒株CAEV—CO株相比,在编码区有12个碱基的缺失,二者的核苷酸同源性为91.0%;