摘要：在免疫抑制者中,作为机会性感染的利什曼病例报告日益增多,病人体内持续存在的利什曼原虫的重新激活可能是这些病人发病的原因。本文综述了人体和鼠模型的利什曼原虫持续感染在皮肤利什曼病复发中的意义。资料提示利什曼原虫持续感染是一种常见现象,对这一现象的深入研究将对探测此病复发的可能性、对复发病人新疗法的评价及抗利什曼原虫疫苗的研制设计等方面可能有重要的意义。

摘要：目的　寻找新的预防日本血吸虫感染疫苗候选分子。　方法　用具保护性的抗血吸虫膜单抗及免疫血清筛选日本血吸虫 c DNA文库 ,PCR扩增 c DNA插入片段 ,A - T连接法将筛选获得的 3个基因片段克隆到p GEM- T载体上 ,自动测序仪测序 ,序列送 BL AST基因服务站进行同源性分析。重新设计引物扩增编号为 B8克隆的开放阅读框碱基序列 ,先将其克隆入 p GEM- T载体质粒 ,再定向亚克隆入 p BK- CMV表达质粒 ,IPTG诱导表达后用 SDS- PAGE和 Western blotting分析表达产物。　结果　经双酶切及 PCR法均证实基因重组成功。其特异性表达产物约为 10 .6 k Da蛋白抗原。表达产物可被免疫血清及单抗识别。　结论　构建了编码日本血吸虫 10 .6k Da蛋白基因表达克隆。

摘要：目的　为了寻找新的预防日本血吸虫病的候选疫苗分子。方法　设计合成引物 ,以日本血吸虫成虫基因组DNA为模板 ,用PCR法扩增出丝氨酸蛋白酶 (Sp)基因编码序列 ,其大小约 45 0bp ,将其克隆入pGEM T载体 ,进行序列测定 ,并将Sp基因克隆入真核表达载体 pBKCMV中。 结果　PCR法扩增出SjSp基因编码序列 ,其大小约 45 0bp ,重组质粒 pGEM T Sp和 pBK Sp经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增 ,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段 ,序列测定结果表明具有一个长度为 42 7bp的不完整开放阅读框 ,其与曼氏血吸虫丝氨酸蛋白酶 (SmSp1)具有高度同源性。 结论　本文首次报道了日本积压吸虫丝氨酸蛋白酶 (SjSp)的部分基因编码序列 ,并克隆入了真核表达载体 pBKCMV中 ,为进一步研究提供了条件。

摘要：目的获得新的可能具有诊断意义的血吸虫蛋白分子并对其鉴定。方法免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库,对获得的阳性克隆进行测序分析,设计引物体外扩增目的蛋白基因,将其亚克隆入原核表达载体pET28a中,并转化大肠埃希菌BL21,进行诱导表达,最后用Westernblotting鉴定。结果获得34个阳性克隆,选择其中24个进行测序,其中13个是日本血吸虫相对分子质量(Mr)为22600膜相关蛋白(Sj22.6)基因。Sj22.6基因在体外被成功扩增,并被亚克隆入pET28a中进行表达。WesternBlotting结果显示,菌体表达的条带可以被感染兔血清以及血吸虫患者血清识别。结论Sj22.6膜相关蛋白基因在童虫cDNA文库中可以被高频率筛出,融合蛋白Sj22.6成功地在BL21中表达并具有免疫反应性。

摘要：目的扩增并表达日本血吸虫表膜蛋白(SjTsp2-A)基因SjTsp2。方法根据与曼氏血吸虫表膜蛋白SmT-sp2基因同源的SjTsp2序列(编号为AY810722)设计引物,体外扩增目的蛋白基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,转化至大肠埃希菌(***)BL21株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,用纯化的重组蛋白免疫小鼠,ELISA检测其血清抗体效价,蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定其免疫反应性。结果PCR扩增获得SjTsp2基因大环核苷酸序列为228bp,与曼氏血吸虫表膜蛋白(SmTsp2)的氨基酸序列同源性为52%。SjTsp2基因亚克隆入pET28a并可溶性表达,免疫小鼠可产生高滴度(最高1∶32000)特异性抗体。Western blotting分析结果表明,纯化的SjTsp2-A蛋白能被疫区居民血吸虫抗体阳性者血清、急性及慢性血吸虫病患者血清识别,与健康人血清无反应。结论日本血吸虫表膜蛋白基因SjTsp2在体外获得表达,其表达蛋白具有一定的抗原性。

摘要：目的　运用免疫学方法筛选日本血吸虫 (中国大陆株 )童虫cDNA文库 ,寻找血吸虫新基因 ,并克隆和鉴定一个日本血吸虫决定性别的Magonashi样蛋白基因。方法　用混合的血吸虫感染者血清免疫学筛选日本血吸虫童虫cDNA文库 ,随机挑取阳性重组克隆进行测序 ,以获得血吸虫基因 ,并通过BLAST程序进行比较及同源性分析 ,根据分析结果设计合成引物 ,用PCR法扩增出日本血吸虫Magonashi样蛋白基因 (SiM)编码序列 ,将其克隆入pGEM T载体和 pBKCMV载体 ,用双酶切、以质粒为模板进行PCR扩增和测序进行鉴定。结果　本研究共挑取 7个阳性克隆 ,通过测序获得了 5个有表达序列标签(ExpressedSequenceTag .EST)价值的序列 ,并进行了同源性分析 ;用PCR法扩增出大小为 4 4 1bpSjM开放阅读框 ,重组质粒pGEM SjM和 pBKCMV SjM经双酶切均可获得一条为PCR产物一致的DNA片段。 结论　本实验获得了 5个有EST价值的序列 ,并成功地克隆了其中SjM编码基因。

摘要：目的构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体。方法设计及化学合成日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的短发夹结构的寡核苷酸,通过退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切的pSUPER质粒连接,构建表达shRNA的重组质粒。结果经酶切及测序证实针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体pSUPER构建成功。结论成功构建针对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因的RNA干扰的表达载体,为进一步研究对日本血吸虫Mago nashi样蛋白基因RNA干扰作用及该基因功能奠定基础。

摘要：目的　获取可能编码新的血吸虫诊断和候选疫苗分子的 c DNA克隆。　方法　利用血吸虫病患者的血清筛选日本血吸虫童虫 c DNA文库 ,获得一批阳性克隆 ,并对 H1克隆插入片段的核苷酸进行序列测定。根据结果 ,一方面进行同源性分析 ;另一方面设计合成引物 ,应用 PCR法进行扩增 ,并将其克隆入 p GEM-T载体。　结果　用抗血清初筛约 7.2× 1 0 3个重组的噬菌体 ,得到 1 2个持续阳性反应克隆 ,其中 H1克隆的插入片段长度为 1 1 86bp,具有一个 5 91 bp的完整开放阅读框 ,与现有的基因无任何同源性。利用 PCR法成功地扩增了该基因 ,并克隆入载体 p GEM-T。　结论　从 c DNA文库中筛选的对血吸虫感染可能具有保护作用的分子克隆是可行的 ,为进一步研究提供了基础。

摘要：以日本血吸虫成虫ＲＮＡ为模板逆转录合成ｃＤＮＡ链，设计合成引物，用ＰＣＲ法扩增谷胱甘肽转移酶（ＧＳＴ） 基因编码序列，将其克隆入ｐＧＥＭ—Ｔ载体，并进行初步鉴定。ｐＧＥＭ—Ｔ—ＧＳＴ克隆载体的成功构建，为进一步选择在不同表达系统中表达ＧＳＴ及其在血吸虫病免疫诊断。

摘要：目的将日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)基因片段克隆到真核表达载体 pBKCMV中,以便对其进行核酸疫苗的研究。方法特定寡核苷酸引物的设计和合成,TRIZOL 提取日本血吸虫成虫 RNA,RT-PCR 法扩增 GST 基因编码序列,将扩增产物连接 pGEM-T 克隆载体,再亚克隆到真核表达载体 pBK CMV 中。结果 RT-PCR 法特异性扩增出 SiGST 编码基因片段,其大小约为670bp,经双酶切、PCR 鉴定表明所构建的质粒 pGEM-T-GST 和 pBK CMV-GST中含有目的基因。结论 pBK CMN-GST 重组质粒的成功构建,为进一步表达 GST 及其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用研究提供了条件。