摘要：HIV/AIDS在世界上广泛流行,抗逆转录病毒药物尚无法彻底根除HIV感染,开发新的治疗和预防方法仍然至关重要。不断分离到的广谱中和抗体(bnAb),在抗HIV-1感染和治疗方面的应用日益突出,也为新疫苗的设计带来曙光。本文对近年来bnAb的分离鉴定的技术及中和表位特征研究进展进行简要综述。

摘要：目的　建立一套新的亚型鉴定方法 ,仅仅使用巢式PCR ,一次扩增 ,即可对我国HIV 1主要流行株B、C和CRF0 1 AE进行亚型鉴定。方法　从HIV阳性样本中提取核酸 ,使用能覆盖HIV 1型M组gag区的引物进行第一轮扩增 ,第二轮扩增则使用分别检测B、C、CRF0 1 AE亚型的三套特异性引物进行扩增 ,三套引物放在同一个反应管中。反应产物经琼脂糖电泳后观察 ,不同亚型的位置不同 ,以此来判断亚型。另外设计一套引物 ,专门检测我国重组株CRF0 7 BC和CRF0 8 BC。所有样品均经过基因测序、系统进化树分析 ,以进行结果验证。结果　在检测的 119份样品中 ,经基因测序和系统进化树分析证实B亚型样品 4 3份 (欧美B 11份 ,泰国B 32份 ) ,C、CRF0 1 AE、A和D亚型样品分别为 5 4份、17份、3份和 2份。其中C亚型的样品 ,有 5 2份属于CRF0 7 BC和CRF0 8 BC。而经过上述多重巢式PCR方法检测到的B亚型样品为 35份 (81 4 % ) ,C亚型 4 6份 (85 2 % )和CRF0 1 AE 13份(76 5 % )。另外 ,检测CRF0 7 BC和CRF0 8 BC重组株的引物特异性地检测到 4 3份 (82 7% )样品。上述结果与基因分析结果吻合 ,各个亚型之间无交叉 ,一种亚型的特异性引物只对该亚型有反应 ,而对其他亚型无反应 ,特异性达到 10 0 %。虽然有时会有非特异扩增带 。

摘要：ＰＣＲ 中使用的耐热ＤＮＡ聚合酶会产生不同程度的ＤＮＡ 复制错误，直接影响基因分析的方法设计、准确性及灵敏度。常用聚合酶的ＤＮＡ复制错误率依次为Ｐｆｕ＜ ｄｅｅｐ Ｖｅｎｔ＜ Ｖｅｎｔ＜ Ｔａｑ＜ ＵＩＴｍａ，ＰｆｕＥｘｏ，各聚合酶有不同的突变热点。对聚合酶忠实性起决定性作用的是聚合酶本身的结构特性，３′５′核酸外切酶校正阅读活性有利于聚合酶的忠实性，Ｍｇ２ ＋ｄＮＴＰｓ、ｐＨ 等反应条件都会影响聚合酶的错误率。

摘要：目的　应用DNA分型技术 ,分析中国彝族人群在HLA Cw位点的等位基因分布频率 ,为进一步研究HLA Cw与HIV感染及其发病进程的关联提供背景资料。方法　设计合成 2 6条特异性分型引物和 1对内对照引物 ,组成 2 4个PCR反应 ,建立PCR SSP分型方法 ,对 10 2例随机选取的无亲缘关系的中国彝族健康人作HLA Cw基因分型。结果　在彝族健康人群中共检测到HLA Cw位点的12种等位基因 ,其中HLA Cw 0 1、Cw 0 7和Cw 0 8为主要分布型别 ,基因频率分别为 0 .3 3 3 3、0 .2 5 0 0和 0 .1765 ,检出了HLA Cw 12、Cw 13 0 1、Cw 14和Cw 15等血清学方法不能鉴定的HLA Cw基因 ;统计分析表明HLA Cw位点的基因型分布符合Hardy Weinburg平衡 (χ2 =65 .983 1,df=66,P >0 .0 5 )。结论　证实了PCR SSP法用于HLA Cw基因分型的可靠性和适用性 ,在DNA水平上提供了中国彝族群体的HLA

摘要：HIV疫苗研究的巨大障碍在于目前设计的包含Env蛋白或表位的疫苗在临床前及临床试验中难于诱导产生广谱中和抗体。近来的研究表明一些HIV-1感染者血清中存在的抗体能够中和多种病毒株,而新的表位作图技术对这些广谱中和血清表位特异性的深入分析将对广谱中和抗体靶向的病毒表位提供新的线索。通过广谱中和血清表位特异性研究获得的信息将促进新的广谱中和单克隆抗体的分离和潜在新表位的鉴定,为合理设计新的疫苗免疫原提供关键信息。

摘要：人白细胞抗原(HLA)系统是目前所知最为复杂的遗传多态性系统,它们负责免疫细胞与其它细胞间的相互识别,参与诱导和调控免疫应答反应.HLA与疾病相关性的研究至今已有30多年的历史,HLA的Ⅰ类和Ⅱ类抗原在某些传染病和自身免疫病的作用,已被人们广泛认识.艾滋病(AIDS)是由艾滋病病毒(HIV)感染引起的严重传染性疾病,目前尚无有效的预防性疫苗和治愈措施.近几年来的研究表明,HLA与HIV感染及发病进程存在关联,有些HLA型别的个体表现出对该疾病的天然抗性,虽多次暴露而不被感染.相反,有些型别的个体则对HIV易感.寻找AIDS的易感和抗性基因是一项非常重要的研究工作,对AIDS与HLA相关性的探讨或许可以另辟蹊径,来阐明疾病的发生机制,为AIDS的基因治疗和免疫预防提供有效的切入途径.

摘要：目的研究中国主要流行的HIV-1 C／B’重组毒株和B’亚型毒株感染者Nef特异性T细胞反应特征，确定两种亚型感染者共同识别的免疫优势区。方法本研究以59名HIV-1 C／B’重组毒株、27名B’亚型毒株感染者为研究对象，用ELISPOT检测针对HIV-1型C／B’Nef重叠多肽产生IFN-γ的特异性T细胞反应。结果44例（74．58％）HIV-1 C／B’重组毒株感染者产生Nef特异性T细胞反应，主要识别EVA7081．1、5、6、7、43、44、45、47、48、49这10条多肽，氨基酸序列为Nef63～115和117～139的区域。20例（74．07％）的HIV-1 B’毒株感染者产生Nef特异性T细胞反应，主要识别EVA7081．1、2、43、49这4条多肽，氨基酸序列为Nef63～77和87～119的区域。两种亚型感染者特异性T细胞反应的强度和广度与病毒载量和CD4细胞数不相关。结论中国HIV-1 C／B’重组毒株和B’亚型毒株感染者共同识别氨基酸序列为Nef63—77和87～115的免疫优势区，提示此区域可用于疫苗的设计．

摘要：目的通过抗原特异性记忆B细胞(Memory B)分选、抗体基因克隆表达和鉴定方法,从艾滋病病毒1型(HIV-1)感染者中获得HIV-1中和抗体,并进一步探讨获得抗体的特征。方法通过检测血浆中和抗体活性和表位筛选,挑选出1例含有CD4结合位点(CD4bs)特异性抗体的慢性HIV-1感染者。采用一对含有/缺失CD4-bs的探针RSC3/ΔRSC3进行Memory B分选,获得抗体可变区基因后进行抗体的表达纯化,并检验所得抗体的结合能力和中和能力。结果从9×106外周血单核淋巴细胞(PBMCs)中分离得6个特异性Memory B。通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出3对重链和轻链可变区基因,配对得到3个抗体,其中有一个抗体具有HIV-1CD4bs结合能力。中和实验表明,这个抗体能中和毒株SF162[50%抑制浓度(IC50=0.89μg/mL]。抗体可变区基因家系分析表明,该抗体属于IGHV1-18家系,重链可变区(VH)自体突变率为12%,低于广谱中和抗体VRC01VH的自体突变率(32%)。结论建立的单克隆特异性Memory B分选方法,可以获得有中和能力的抗体。该平台有希望获得具有我国自主知识产权的广谱中和抗体,并为开发抗体药物和设计新型免疫原提供技术支持。

摘要：目的从中国人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type I, HIV-1)慢性感染者体内筛选针对膜蛋白的单克隆抗体并对其进行功能鉴定。方法采用单细胞特异性分选的方法从HIV-1感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中筛选抗原特异性单个B细胞,通过逆转录和巢式PCR获得抗体重链和轻链的可变区基因。利用免疫遗传学数据库(immunogenetics database, IMGT)分析抗体基因家系及突变率。抗体表达纯化后,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)鉴定其结合活性和识别表位,通过假病毒中和实验检测抗体中和能力。结果从1例慢性HIV-1感染者样本中筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性抗体。抗体重链可变区基因来自IGHV1-69*09、IGHV1-08*01、IGHV1-46*01、IGHV4-34*01、IGHV4-61*01和IGHV3-43*02家系,突变率为10.76%~21.05%。轻链可变区基因来自IGKV3-20*01、IGKV1-39*01、IGKV1-NL1*01、IGKV3-15*01和IGKV1-9*01家系,突变率为6.03%~18.64%。7个抗体均可以结合gp140,其中抗体508-B1、508-C1、508-C5、508-D4和508-E5主要识别gp41区;508-D6和508-F1结合gp120区。508-D4和508-F1分别可以中和Global Panel假病毒盘中的CNE8(Tier 2)和X2278(Tier 2),IC50值分别为38.1 μg/ml和41.7 μg/ml。结论本研究成功筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性的单克隆抗体,其中5个为识别gp41区的单克隆抗体,2个为gp120结合抗体。2个抗体具备有限的中和能力。该组抗体可为HIV-1检测试剂和抗体药物研发以及艾滋病疫苗免疫原设计提供技术储备。

摘要：目的探讨我国HIV-1B’/C重组病毒感染者针对HIV-1调节蛋白的细胞免疫反应特征及其与病毒复制控制的关系。方法以覆盖HIV-1C亚型Vpr、Vpu和Vif蛋白全长的重叠肽段作为刺激抗原,利用ELISPOT方法检测新疆HIV-1B’/C重组病毒感染者的特异性细胞免疫反应。使用SIGMAPLOT10.0和SIGMASTAT3.5进行统计分析,用双尾t检验比较组间差异,用Spearmam秩相关分析免疫反应与病毒载量及CD4细胞计数的关系。结果在检测的60名HIV-1B’/C重组病毒感染者中,能够识别Vif、Vpr和Vpu蛋白产生CTL应答者分别为68%、52%和8%,Vpr和Vif蛋白存在多个强CTL反应的免疫优势区域。研究中还发现针对Vpr、Vif和Vpu蛋白的CTL反应强度和广度与HIV感染者的病毒载量及CD4细胞数量无明显的相关性。结论HIV-1Vpr和Vif蛋白包含多个可被机体免疫系统特异性T细胞识别的免疫优势区域。对这些免疫优势区所包含的CTL表位进行鉴定并探讨其在自然感染过程中的作用,对新一代的HIV疫苗设计有重要的参考意义。