摘要：目的研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法。方法以大肠杆菌O157∶H7的O157抗原基因(rfbE基因)、鞭毛H7抗原基因(fliC基因)、粘附素基因(eaeA基因)和志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ(SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因)为扩增对象,设计能导至目的片段大小不同的5对引物,通过优化条件,建立了可用于粪便检测的大肠杆菌5重PCR。结果在同一扩增体系中,检测了5株不同来源的大肠杆菌O157∶H7及27株非大肠杆菌O157∶H7细菌。结果表明,该方法能从2株大肠杆菌O157∶H7中扩增出rfbEf、liC、eaeA、SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因,它们的大小分别为582 bp、802 bp、487 bp3、68 bp和177 bp。而另外3株大肠杆菌O157∶H7也能扩增出除eaeA、SLT-Ⅱ基因外的其它3个基因片段。表明该方法可用于检测大肠杆菌O157∶H7,还可检测细菌是否含有毒素基因。在检测27株非大肠杆菌O157∶H7,除O149出现SLT-II扩增产物和O1∶H7出现fliC基因扩增产物外,其它非大肠杆菌O157∶H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性。当粪便样品经增菌培养12 h,用该5重PCR体系能检测出最初接种量为5cfu/g粪便的样品。结论本5重PCR方法具有较高的特异性和敏感性,可迅速、有效地将大肠杆菌O157∶H7与其它非大肠杆菌O157∶H7相区别,同时还能检测O157∶H7中的毒力因子。因此,通过进一步研究,本方法有望应用于临床大肠杆菌O157∶H7感染的辅助诊断。

摘要：根据发表文献,设计合成三对引物,建立三重PCR方法,分别扩增猪链球菌2型cps2J、epf,mrp基因,目标片断大小分别为:230bp、570bp、860bp。对三重PCR方法进行特异性、敏感性、重复性试验,结果显示该三重PCR方法特异性好,敏感性高,重复性好,能快速的检测猪链球菌2型。

摘要：为建立一种检测狂犬病病毒的方法,根据Gen Bank已公布的狂犬病病毒核蛋白N基因序列,设计并合成一对特异性的引物,以兽用疫苗株HEP-Flury为阳性毒株建立了RT-PCR检测方法。对建立的RT-PCR方法做灵敏度、特异性、重复性及稳定性试验,结果显示该方法的灵敏度可以达到20 FFU/m L,可以将狂犬病病毒与犬瘟热病毒和犬细小病毒区别开来。该方法重复性好,稳定可靠。

摘要：为建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症和尿苷酸核酶缺乏症两种遗传缺陷病的检测方法,根据文献报道的精氨酸琥珀酸合成酶、UMPS基因核苷酸序列,设计引物,通过条件的优化,建立了巢式PCR反应体系。结合PCR产物测序,建立了检测CN和DUMPS方法。取243份临床牛血清样品用巢式PCR检测并测序,发现CN野生型238份,CN杂合子型5份,CN突变型0份;DUMPS野生型236份,DUMPS杂合子型5份,DUMPS突变型2份。所建立的巢式PCR方法灵敏、特异,还兼具高通量的特点,适合口岸对荷斯坦奶牛CN和DUMPS遗传缺陷病的大样品量检测。