摘要：目的探讨携带大鼠细胞间黏附分子1(ICAM-1)核糖核酸干扰(RNAi)的重组慢病毒构建方法,筛选出基因抑制效率最高的重组慢病毒。方法(1)根据基因序列,设计并合成针对4个靶点的寡核苷酸,将其与双链DNAoligo进行连接反应;将连接产物转化DH5α大肠杆菌,PCR筛选获得阳性克隆并进行基因测序。(2)将重组载体与病毒包装质粒共转染人胚肾293T细胞,获得病毒颗粒。(3)重组慢病毒体外转染NRK细胞,以RT-PCR法筛选出基因抑制效率最高的重组慢病毒。结果(1)经过酶切、连接、转化后获得阳性克隆;基因测序结果完全正确。(2)经RT-PCR证实,3号病毒在感染复数(MOI)=50时,基因抑制率即达到88.4%。结论成功构建了含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的大鼠ICAM-1RNAi慢病毒载体。

摘要：背景:输尿管等尿路重建材料的选择和开发是目前组织工程学研究的热点,人羊膜是一潜在的理想天然材料。目的:探讨新鲜完整人羊膜应用于兔输尿管缺损重建的疗效。设计、时间及地点:人羊膜重建动物输尿管,形态学观察实验,于2007-09/2008-03在苏州大学附属第一医院泌尿外科实验室完成。材料:健康雌性大白兔36只,足月剖腹产健康孕妇的人羊膜。方法:新鲜人羊膜裁剪成片状,以硬膜外导管为支架,做成袖套状,替代4cm的大白兔输尿管缺损。36只成模大白兔均分为1个月治疗组和3个月治疗组,实验结束时,取羊膜输尿管行病理学检查和免疫组织化学检查平滑肌细胞α-Actin和移行上皮细胞CKAE1/AE3的表达情况。主要观察指标:人羊膜上是否形成黏膜层和肌肉层,人羊膜输尿管管腔情况。结果:36只大白兔中,1个月治疗组死亡6只,3个月治疗组死亡8只,死亡原因均为感染。1个月治疗组大白兔羊膜输尿管柔软,长4cm,管壁变厚,无挛缩,移行上皮组织爬满内壁,平滑肌组织部分再生,但较稀疏,排列不规则;免疫组织化学检查提示CKAE1/AE3染色阳性,α-Actin染色微弱。3个月治疗组大白兔羊膜输尿管与周围粘连,有丰富的血运,无明显挛缩,管腔不缩小,已形成良好的移行上皮层和平滑肌层,免疫组织化学显示α-Actin和CKAE1/AE3染色均为阳性。结论:新鲜完整人羊膜作为支架可以用于输尿管缺损的重建,是理想的天然组织工程材料。

摘要：目的 使用Immuknow法监测肾移植术后受者CD＋T淋巴细胞内腺苷三磷酸（ATP）水平,探讨该方法在肾移植术后感染中的诊断价值及与药物谷浓度的相关性. 方法 选取2010年5月至2011年10月收治的肾移植受者45例,男33例,女12例.年龄21～58岁,平均（39±11）岁.根据术后是否发生感染将受者分为非感染组34例和感染组11例,感染组中肺部感染5例、上呼吸道感染4例、尿路感染1例、会阴部脓肿1例.选择健康志愿者23例作为对照组,男16例,女7例.使用Immuknow法检测各组的外周血中CD：T淋巴细胞内ATP水平.采用微粒酶联免疫法和荧光偏振免疫法检测他克莫司和环孢素的药物谷浓度.采用免疫比浊法检测受者血清中超敏C-反应蛋白浓度. 结果 对照组外周血中CD＋T淋巴细胞内ATP值为（295±74）μg/L,非感染组为（335±189）μg/L,感染组为（212±155）μg/L,感染组的ATP值明显低于对照组和非感染组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.动态随访24例受者中5例发生感染,4例ATP值低于其术后随访的平均值.感染组血清C-反应蛋白浓度为（12.4±4.8） mg/L,明显高于非感染组的（3.3±4.7） mg/L和对照组的（0.5±0.5）mg/L,差异均有统计学意义（P＜0.05）.Immuknow法测得的ATP值与环孢素（r=0.07）和他克莫司（r=-0.02）的血药物谷浓度均无相关性（P＞0.05）. 结论 低ATP水平是肾移植术后感染的危险因素,使用Immuknow法监测受者的细胞免疫状态能弥补药物浓度监测的不足,指导临床调整免疫抑制剂用量.