摘要：目的 建立一种基于多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的多种流感病毒核酸快速检测方法.方法 对5种亚型流感病毒的HA基因序列进行比对分析,选择合适的保守区域设计引物序列,并在扩增产物序列内部选择高变区设计探针序列.首先,使用生物素标记的引物扩增出同样带标记的PCR产物;然后,产物与膜上的探针杂交,通过生物素-亲和素反应,最后以斑点显色的方式来检测和鉴别不同亚型的流感病毒.实验中还通过摸索不同的引物浓度和探针浓度来优化反应条件.结果 成功建立了一种基于多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的检测方法,该方法能够成功检测和鉴别5种不同亚型的流感病毒,检测灵敏度比传统的RT-PCR方法高100～1000倍.结论 成功建立了一种可高通量快速检测多种流感病毒的多重RT-PCR结合反向斑点杂交技术的检测方法.

摘要：目的建立流感／禽流感病毒及其致病力鉴别的基因芯片检测技术。方法以血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、核蛋白（NP）基因作为靶片段，设计病毒检测和致病力特异性鉴别探针，建立基因芯片鉴别检测技术，采用单引物扩增法（SPA）处理样本核酸，分别对此芯片进行特异性、敏感性和符合率评价。结果此芯片能够特异性的检测H1N1、H3N2、B型流感病毒及H5N1、H9N2禽流感病毒，敏感性分别为8HAU、16HAU、32HAU及8HAU、8HAU。致病力鉴别探针敏感性为32HAU。同RT-PCR方法比较，检测灵敏度为83．9％。结论建立的常见流感病毒检测基因芯片特异性高、敏感性高、灵敏度高，更能够对致病力进行有效甄别，可作为临床诊断、传染病防控等方面的有益补充。

摘要：目的建立人感染高致病性禽流感病毒H5N1的核酸检测方法,用于人感染高致病性禽流感病毒疑似病例临床标本的检测。方法针对甲型流感病毒保守基因M设计RT-PCR和real-timePCR引物检测是否为甲型流感病毒,同时针对H5N1禽流感病毒设计针对H5和N1基因的特异性RT-PCR和real-timePCR引物作亚型检测,建立禽流感H5N1病毒RT-PCR和real-timePCR检测方法。结果本研究建立的RT-PCR和real-timePCR方法可以特异性地检测H5N1病毒,并且与人流感病毒H1、H3没有交叉反应。RT-PCR检测方法灵敏度可到1TCID50,real-timePCR灵敏度可达0·01TCID50。利用上述方法检测人感染高致病性禽流感病毒H5N1疑似病例临床标本,从42例不明原因肺炎病例中检测出阳性标本13例。结论本研究建立的RT-PCR和real-timePCR方法可以用于人感染高致病性禽流感病毒H5N1临床标本的实验室检测。