摘要：目的:探讨沉默信息调节因子7(SIRT7)对高糖环境下小鼠肾足细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:在体外高糖条件下培养小鼠肾足细胞,构建SIRT7过表达载体(pcDNA3.1-SIRT7)和小干扰RNA-SIRT7(siRNA-SIRT7)干扰载体并转染小鼠肾足细胞,依据干预因素分组设计为空白对照组(Control)、高糖组(HG)、SIRT7过表达+高糖组(SIRT7 OE+HG)、SIRT7过表达阴性对照+高糖组(SIRT7 OE-NC+HG)、siRNA-SIRT7干扰+高糖组(siRNA-SIRT7+HG)、siRNA-SIRT7干扰阴性对照+高糖组(siRNA-SIRT7-NC+HG)。实时荧光定量RT-qPCR和免疫印迹验证SIRT7过表达和干扰效率。采用CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量RT-qPCR分析SIRT7的mRNA表达水平,免疫印迹检测小鼠肾足细胞功能蛋白Nephrin和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果:CCK-8检测结果显示,与Control组比较,HG组细胞的增殖活性下降(P<0.05),与HG组比较,siRNA-SIRT7+HG组细胞的增殖活性显著降低(P<0.05),而SIRT7 OE+HG组细胞的增殖活性增强(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,与Control组比较,HG组细胞的凋亡率升高(P<0.05),与HG组比较,siRNA-SIRT7+HG组细胞的凋亡率显著升高(P<0.05),而SIRT7 OE+HG组细胞的凋亡率下降(P<0.05)。免疫印迹检测结果显示,与Control组比较,HG组Nephrin、Wnt5a和β-catenin蛋白表达下调(P均<0.05),与HG组比较,siRNA-SIRT7+HG组Nephrin、Wnt5a和β-catenin蛋白表达显著下降(P均<0.05),而SIRT7 OE+HG组Nephrin、Wnt5a和β-catenin蛋白表达显著升高(P均<0.05)。结论:高糖环境可抑制小鼠肾足细胞增殖并诱导凋亡、过表达SIRT7可逆转该作用,其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路的活性有关。

摘要：目的制定成人危重患者皮质类固醇激素不足的诊断和治疗建议的共识声明。参与者:由美国危重症医学会和欧洲重症监护医学会的会员组成一个多学科、多专业的专家工作组。此外,还邀请了内分泌学的国际专家参加。设计/方法工作组成员对已发表的文献进行综述并提出专家意见,然后从中得出共识。并采用修正的Delphi方法制定共识声明。根据试验设计、研究结果的可信度和证据直接性等因素,采用修正的等级系统对每个建议的强度进行量化,将建议按等级分为强(1级)或弱(2级)和证据的质量高(A级)、中等(B级),或低(C级)。结果工作组以危重症相关的皮质类固醇激素不足作为范围进行检索,以此描述在危重症期间发生的下丘脑-垂体-肾上腺轴功能障碍。危重症相关的皮质类固醇激素不足是由肾上腺功能不全同时伴组织皮质类固醇激素抵抗引起的,并以过度且持久的炎症反应为其特征。对补液和升压药反应不佳的低血压患者应怀疑危重症相关的皮质类固醇激素不足,尤其是在败血症的情况下。而在这种情况下,组织皮质类固醇激素抵抗的诊断仍然存在很大困难。危重症患者的肾上腺功能不全的诊断最好采用促肾上腺皮质激素(250μg)刺激后的血清总皮质醇增加值<9μg/dl或者随机总皮质醇<10μg/dl作为诊断标准。而在这种情况下,似乎仅在需要使用升压药的感染性休克患者与早期严重急性呼吸窘迫综合征患者(氧合指数PaO2/FiO2<200,且在发病后14天之内)才显示糖皮质激素治疗的益处。而这些需要糖皮质激素治疗的感染性休克或急性呼吸窘迫综合征的患者不应该采用促肾上腺皮质激素刺激试验来鉴别。感染性休克推荐氢化可的松剂量是200mg/d分四次输注或240mg/d(10mg/h)连续输注≥7天。严重早期急性呼吸窘迫综合症患者推荐甲泼尼龙的剂量是1mg/(kg d)≥14天。糖皮质激素应该缓慢停药而不能突然停药。若发生败血症、低血压或氧合作用恶化等复发的迹象时应考虑重新使用激素。地塞米松不被推荐用于治疗危重症相关的皮质类固醇激素不足。糖皮质激素在社区获得性肺炎,肝功能衰竭,胰腺炎,及接受心脏手术和其他类型的危重症人患者中的作用还需要进一步评估。结论基于循证证据的危重症相关的皮质类固醇激素不足的诊断和治疗建议共识声明由多学科、多专业工作组制定完成。严重的疾病和应激强烈激活下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴并刺激脑垂体释放促肾上腺皮质激素(ACTH),后者增加肾上腺皮质释放皮质醇。这种激活是机体应对疾病和应激的基本适应能力,有助于维持细胞和器官的稳态。肾上腺切除的的动物迅速死于出血性和感染性休克,而类固醇激素替代治疗可免于死亡。曾经被认为在重症监护病房中的少见的"肾上腺功能衰竭",其实在感染性休克、重症社区获得性肺炎、创伤、颅脑损伤、烧伤、肝衰竭、艾滋病毒感染、胰腺炎、心脏手术后、使用依托咪酯后和脑死亡器官捐赠者等危重症患者中被诊断得越来越多。肾上腺功能衰竭可能与肾上腺、脑下垂体或下丘脑的结构损伤有关。然而,许多危重症患者仅出现下丘脑-垂体-肾上腺轴可逆性衰退。尽管人们普遍认为危重症患者出现肾上腺衰竭可能较常见,但是其诊断和治疗仍然存在争议,而且缺乏专家的统一意见。因此,该工作组的目的就是由该领域的专家在现有的最佳科学证据基础上制定共识声明。

摘要：目的研究糖尿病血管内皮细胞NF-κB信号途径,从而为防治糖尿病血管并发症提供新的治疗策略。方法设计、合成针对NF-κB基因ShRNA的寡核苷酸序列;构建腺病毒载体质粒,转染293A细胞,进行病毒包装、扩增;腺病毒载体转导血管内皮细胞,通过RT-PCR和Western blot从mRNA以及蛋白质水平验证构建的病毒载体对血管内皮细胞NF-κB表达的抑制效应;用Western blot验证NF-κB干扰的血管内皮细胞中JNK(c-Jun氨基末端激酶)的变化。结果高浓度葡萄糖的条件下,内皮细胞NF-κB的表达量显著升高;干扰RNA有效干扰了正常血糖和高血糖环境下NF-κB及p-JNK的表达;p-JNK的表达随着NF-κB表达的下降而下降。结论高糖通过NF-κB及JNK的信号传导通路影响内皮细胞的凋亡。