摘要：目的:探讨针对乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)preS1 dsDNA同聚嘌呤区设计反基因锁核酸分子,并观察其在HepG2 2.2.15细胞内抑制病毒复制的效果.方法:针对HBVpreS1 dsDNA的2941-2962 nt、3 015-3 036 nt和3 089-3 110 nt三个同聚嘌呤区,利用RNA structure软件分别设计合成锁核酸、硫代寡核苷酸、未修饰寡核苷酸及无关对照序列,以阳离子脂质体介导转染HepG22.2.15细胞,采用荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR)和时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)分别监测1、3、5和7 d细胞培养上清液中HBV DNA和HBsAg的含量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测锁核酸对细胞代谢的影响.结果:反基因锁核酸对细胞内的HBV DNA复制与HBsAg表达有明显的抑制作用,且抑制率随时间呈增高趋势,7 d后抑制率分别为64.32%和67.51%.各实验组与对照组比较差异均具有统计学意义(均P<0.05),而封闭2 941-2 962 nt同聚嘌呤靶区的LNA抑制作用最强,且最适序列长度为20-30 ***对细胞代谢无明显影响.结论:针对preS1 dsDNA同聚嘌呤区的反基因锁核酸分子,体外能有效抑制HBV的复制,以封闭2 941-2 962 nt靶位效果最强,且合适序列长度为20-30 bp.

摘要：目的建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法检测宫颈疾病患者血清中miR-21的表达水平,探讨miR-21在宫颈癌临床监测中的意义。方法设计miR-21、U6茎环逆转录引物和PCR扩增引物,以U6为内参,用实时荧光定量PCR检测32例不同宫颈疾病患者血清中miR-21表达水平。结果建立的实时荧光定量PCR法能特异地检测血清中的miR-21扩增信号,熔解曲线单一,产物特异。宫颈癌患者血清中miR-21水平明显高于子宫肌瘤、宫颈炎等其他良性宫颈疾病(P<0.05),而宫颈癌患者手术切除后血清中miR-21水平明显下降(P<0.05)。结论 SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR是一种快速简便、敏感性高、特异性好的检测方法,对宫颈癌早期诊断、分子分期和预后判断有很好的应用前景。

摘要：目的探讨针对乙肝病毒前S1基因同聚嘌呤区的锁核酸体外抑制细胞内病毒复制的作用。方法针对乙肝病毒前S1基因同聚嘌呤区,利用RNA structure软件分别设计合成锁核酸、硫代寡核苷酸、未修饰寡核苷酸及无关对照序列,以阳离子脂质体介导转染HepG2.2.15细胞,采用荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR)、时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)和酶联免疫法(ELISA)分别监测1、3、5和7 d细胞培养上清液中HBV DNA、HBsAg和前S1抗原的含量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测锁核酸对细胞代谢的影响。结果加入锁核酸后,对HBV DNA复制、HBsAg和前S1抗原表达均显示有较强的抑制作用,且抑制率随时间呈增高趋势,7 d后抑制率分别达65.99%、67.49%和63.88%。LNA对细胞代谢无明显影响。结论针对乙肝病毒前S1基因同聚嘌呤区的反基因锁核酸,体外能有效抑制乙肝病毒的复制,既为乙肝病毒治疗提供有效靶位,也为反基因治疗提供理论和实验依据。

摘要：目的探讨经α-地中海贫血基因诊断试剂盒检测为-α3.7/αα(右向缺失,静止型)的样本中是否携带anti4.2片段,以判断是否存在漏诊的香港型地中海贫血(HKαα)。方法设计HKαα和anti4.2片段的引物,用巢式PCR检测50例-α3.7/αα样本中是否存在anti4.2片段,并结合平均红细胞体积(MCV)及血红蛋白A2(HbA2)比较分析。结果巢式PCR结果表明,50例-α3.7/αα样本中存在8例为HKαα型,漏诊率为16%;且HKαα携带者的MCV明显高于-α3.7/αα携带者,差异有统计学意义(t=7.04,P<0.05)。结论巢式PCR可鉴别HKαα与-α3.7/αα携带者,提高其检出率。

摘要：恶性肿瘤严重危害人类生命健康,为了设计和选择更好的治疗方案,早期诊断是其治疗中最重要的步骤之一。虽然近年来急性髓系白血病(AML)的诊治方法不断提高,但其长期无病生存率仍然较低。因此,探寻更加灵敏、特异的早期生物学标志物,尽早明确AML的诊断和治疗方案,对提高AML患者的长期无病生存率具有重要意义。随着无创检验技术的不断创新,循环肿瘤标志物成为研究的热点。这些肿瘤标志物的出现为AML的早期诊断提供了新靶点,并为患者的预后和生存带来希望。本文主要对近年来报道的AML相关循环肿瘤标志物及其在临床的应用价值进行综述。

摘要：[目的]系统评价国内有关乳腺癌组织中Ki67表达及其临床意义的病例对照研究。[方法]计算机检索CBM、CNKI、VIP和万方数据库，并辅以文献追溯的方法，收集国内公开发表的所有关于乳腺癌组织中Ki67表达及其与临床病理特征关系的病例对照研究。检索年限均从建库至2013年10月1013。按纳入和排除标准筛选文献并评价纳入研究质量后，应用RevMan5．0和Statal2．0软件进行Meta分析。[结果]共纳入12个病例对照研究，其中乳腺癌756例，非乳腺癌1421例。Meta分析结果显示，Ki67在乳腺癌组与非乳腺癌组（OR=6．01，95％CI：4．72-7．66）、乳腺癌临床Ⅰ-Ⅱ期组与Ⅲ-Ⅳ期组（OR=0．33，95％CI：0．18—0．61）、乳腺癌患者年龄≤35岁组与〉35岁组（OR=1．91，95％CI：1.37-2．66）的表达差异均有统计学意义；Ki67在乳腺癌有淋巴结转移组与无淋巴结转移组（OR=1．53,95％CI：0．98～2．39）表达差异则无统计学意义。[结论]Ki67可能在乳腺癌中过度表达，其表达与乳腺癌的临床病理特征密切相关，对乳腺癌的早期诊断、治疗及预后判断具有重要意义．但其能否作为乳腺癌诊断及预后的可靠指标尚不确定，需要进行更多设计严谨、细致的高质量流行病学研究来进一步证实。

摘要：目的:运用Taqman探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平并探讨其临床意义。方法:设计miR-122及U6 snRNA的茎环引物和Taqman探针,运用Taqman探针实时荧光定量PCR检测27例肝癌术前(HCC)患者、15例乙型肝炎(hepatitis B)患者、15例丙型肝炎(hepatitis C)患者、15例正常对照者(HC)、11例肝癌术后(PHCC)患者及10例肝癌术后复发(recurrence)患者血清中miR-122的表达水平,并分析miR-122与肝脏疾病相关标志物的关系。结果:Taqman探针实时荧光定量PCR方法能检测血清中miR-122的表达。HCC、hepatitis B、hepatitis C及recurrence患者血清中miR-122的表达水平均高于HC和PH-CC患者(P0.05),PHCC患者血清miR-122的表达水平比HCC和recurrence患者低(P<0.05)。血清乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性和(或)乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性患者血清miR-122的表达水平高于阴性者(P<0.05)。血清丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)阳性患者血清miR-122的表达水平高于阴性者(P<0.05)。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与miR-122的表达水平有正相关性(r=0.34,P<0.05)。血清甲胎蛋白(AFP)≥400μg/L组血清miR-122的表达高于AFP<400μg/L组(P<0.05)。结论:Taqman探针实时荧光定量PCR适用于检测血清miR-122的表达水平。在HCC、hepatitis B、hepatitisC及recurrence患者血清中miR-22均有不同程度的增高,尤其是hepatitis C患者,且PHCC患者血清miR-122表达下降,复发后升高。血清miR-122的表达与肝脏疾病的某些指标有关,提示血清miR-122可作为肝脏疾病,特别是肝癌早期诊断、手术疗效及预后判断的新指标。

摘要：目的:探讨针对乙肝病毒前S2基因同聚嘌呤区的锁核酸体外抑制细胞内病毒复制的作用。方法:针对乙肝病毒前S2基因同聚嘌呤区,分别设计合成锁核酸、硫代寡核苷酸、未修饰寡核苷酸及无关对照序列,以半乳糖配体介导转染HepG2.2.15细胞,采用荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR)、时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)和酶联免疫法(ELISA)分别监测1、3、5和7 d细胞培养上清液中HBV DNA、HBsAg和前S2抗原的含量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测锁核酸对细胞代谢的影响。结果:加入锁核酸后,对HBV DNA复制、HBsAg和前S2抗原表达均显示有较强的抑制作用,且抑制率随时间呈增高趋势,7 d后抑制率分别达61.56%、68.18%和72.82%。各实验组与对照组比较差异均具有统计学意义(均P<0.05)。LNA对细胞代谢无明显影响。结论:针对乙肝病毒前S2基因同聚嘌呤区的反基因锁核酸,体外能有效抑制乙肝病毒的复制,既为乙肝病毒治疗提供有效靶位,也为反基因治疗提供理论和实验依据。