摘要：为建立一种简单、快速的鲤浮肿病毒(CEV)重组酶介导的链替换扩增(RAA)检测方法,本研究通过比较分析CEVP4a基因序列,设计引物与探针,经过筛选优化,建立了实时荧光RAA检测方法。结果显示,该方法在39℃恒温反应20min即可快速、特异性地检测出CEV,与常见的鱼类病毒不发生交叉反应,其对质粒标准品的检测下限为2.8×10^1拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于5%。利用本研究建立的方法对35份临床鲤科鱼类样品进行检测,检测结果与荧光定量PCR方法结果一致。本研究建立的检测方法操作简单,特异性强、敏感性高,结果可靠,不依赖于复杂的仪器,适用于现场对CEV的快速检测。

摘要：目的建立检测棘鳞蛇鲭(Ruvettus pretiosus, RP)和异鳞蛇鲭(Lepidocybium flavobrunneum, LF)两种油鱼的双重实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法。方法基于棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因分别设计特异性引物和探针,并对方法进行灵敏度、特异性和重复性分析,建立双重实时荧光PCR方法。结果模板量在8.4×10^5~8.4×10^0 copies/μl范围内,方法具有良好的线性关系,棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭的线性回归方程分别为y=-3.18x+41.0(R^2=0.998 8)和y=-3.37x+44.5(R^2=0.998 6),方法组内相对标准偏差(RSD)为0.29%~0.84%。其中,检测棘鳞蛇鲭的组内RSD为0.29%~0.84%,检测异鳞蛇鲭的组内RSD为0.29%~0.62%。方法最低检测限为16.8 copies/反应,并且从随机购买的50份鳕鱼样品中鉴定出油鱼成分棘鳞蛇鲭。结论本试验建立的双重实时荧光PCR方法能够特异性地鉴定出棘鳞蛇鲭和异鳞蛇鲭,具有实际应用潜力。

摘要：为建立一种简单、快速的病毒性出血败血症病毒(VHSV)检测方法,本研究通过比较分析VHSV N基因的保守序列,设计了多对引物和一条探针。经过筛选优化,建立了实时荧光RT-RPA检测方法。该方法在39℃恒温反应20 min即可快速、特异性地检测出VHSV,与其他水生动物病毒不发生交叉反应,该方法检测限为1.83×10^3PFU/mL,利用本研究方法对30份鲑鳟鱼临床样品以及9份鱼类疫病病原样品进行检测,检测结果与荧光定量PCR方法结果一致。上述结果表明,本研究建立的检测方法操作简单,反应灵敏,结果可靠,仪器依赖性低,适用于现场对VHSV快速检测。

摘要：为建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的荧光重组酶介导扩增(RAA)方法,本试验参考世界动物卫生组织(WOAH)《水生动物法典(第6版)》所列的诊断方法确认原则,根据IHNV核酸保守序列设计特异性引物和探针,选用其G蛋白保守序列中长度为196 bp的片段构建重组质粒,在不同反应条件下进行优化,建立RT-RAA检测技术,并通过26个IHNV不同基因型毒株和本实验室保存样品进行验证。结果显示,该方法对5个基因型IHNV的26种毒株均敏感,与另外7种RNA病毒无交叉反应,且反应时间仅为RT-PCR的1/5;对重组质粒原液做4个梯度稀释后,在10-4稀释度时完全呈阴性;通过对71份临床样品的验证,阳性检出率为80.28%。上述结果表明,本研究建立的RT-RAA方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好、检测时间短、不完全依赖实验室设备和条件等优势,可为IHN防控提供更便捷、更适合现场检测的工具。

摘要：目的：探讨急性期脑弥漫性轴索损伤（ｄｉｆｕｓｅａｘｏｎａｌｉｎｊｕｒｙ，ＤＡＩ）的病理改变及与ＣＴ、ＭＲＩ特征的相关性。材料和方法：本实验应用自行设计的“损伤加速机”对２２只猫按两种大小不等的角加速度损伤，首次应用猫建立了ＤＡＩ动物模型。结果：急性期（７２小时内）ＤＡＩ的病理表现为轴索的扭曲、肿胀、断裂及间质水肿。ＣＴ可见弥漫性脑肿胀、皮层下及脑深部小出血灶、蛛网膜下腔及脑室内出血。ＭＲＩ可见弥漫性脑肿胀（脑白质在Ｔ１加权像上信号减低及脑沟、脑裂消失）和单发或多发脑白质小灶性损伤（脑白质在Ｔ２加权像上可见单发或多发小灶性高信号影）。离体脑白质磁共振波谱（ｍａｇｎｅｔｉｃｒｅｓｏｎａｎｃｅｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，ＭＲＳ）检查发现损伤后脑白质游离水相对含量明显高于正常对照组，损伤后结合水相对含量明显低于正常对照组，二者Ｔ１值均较正常对照组延长。结论：ＭＲＩ对ＤＡＩ的诊断价值明显优于ＣＴ。通过对ＣＴ、ＭＲ图像分析，可以间接推测ＤＡＩ的病理改变及程度，有利于做出正确、全面的诊断和制定恰当的治疗方案。