摘要：目的探讨凋亡抑制蛋白livin在人胃癌组织中的表达及其与临床病理的关系,研究小分子干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞系(SGC-7901)livin基因表达的抑制作用,以及livin基因沉默后对胃癌细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法和Western blot法检测胃不同组织中livin基因mRNA和蛋白的表达,分析livin表达与临床病理的关系;设计两条针对人源livin基因的siRNA,分别转染SGC-7901细胞;RT-PCR法检测转染前后livin基因的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化以及细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂的半数抑制浓度(IC_(50))的改变,流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化。结果40例胃癌组织中,livin表达阳性率为47.5%(19/40);在癌旁组织和良性病变胃黏膜组织中,livin表达呈阴性。组织分化程度差、淋巴结转移者的livin表达率高(P<0.05)。livin特异性siRNA转染48h后,SGC-7901细胞中的livin mRNA表达受到抑制,细胞增殖能力减弱,对5-Fu和顺铂凋亡敏感性增加,同时IC_(50)降低(P<0.05)。结论livin在胃癌组织中表达增高,且与组织分化程度和淋巴结转移有关,可作为辅助胃癌预后判断的分子标志之一;RNA干扰可明显抑制livin基因表达,并使胃癌细胞的凋亡敏感性增加;livin有可能成为通过诱导细胞凋亡增强胃癌治疗效果的一个分子靶点。

摘要：目的:研究livin特异性小分子干扰RNA (siRNA)沉默胃癌SGC-7901细livin基因及对促胃癌细胞凋亡的影响。方法:设计针对人源livin基因的两条SiRNA:si-livin1和si-livin2,分别转染至对数生长期的胃癌SGC-7901细胞:逆转录酶链式反应(RT- PCR)检测转染前后胃癌SGC-7901细胞livin基因表达的变化,MTT法检测转染前后该细胞对5-FU、顺铂的半数抑制浓度(IC50)的变化以及检测转染前后细胞增殖能力的变化,PI染色后流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡的变化。结果:livin特异性siRNA转染胃癌SGC-7901细胞48h后,si-livin1组livinαmRNA(灰度值表示)表达较空白对照组和阴性对照组显著减少(livinα:0.167±0.013 vs 0.403±0.036,0.389±0.053;livinβ:0.181±0.028 vs 0.413±0.041,0.404±0.029,均尸<0.01),而si-livin2组livin mRNA表达相比于空白对照组和阴性对照无显著差异;转染siRNA后,si-livin1组胃癌细胞生长缓慢,生长曲线较对照组平缓;si-livin1组细胞对5-FU和顺铂半数抑制浓度IC50较空白对照组和阴性对照组显著降低(5-FU:34.07±2.98 vs 74.39±4.91,69.85±4.57;顺铂:4.56±0.35 vs 9.07±0.44,7.96±0.64,均P<0.01);转染siRNA后,si-livin1组胃癌细胞自发凋亡率较空白对照组和阴性对照组增加(11.07±1.36 vs 3.54±2.89,6.72±1.77,P<0.01,P<0.05).5-FU和顺铂作用后,si-livin1组胃癌细胞凋亡率较空白对照组和阴性对照组显著增加(5-FU:34.90±1.76 vs 11.54±O.83,13.54±2.55;顺铂:48.14±2.70 vs 14.51±0.35,15.71±0_34,均P<0.01).结论:RNA干扰可有效沉,livin基因表达从而抑制胃癌SGC-7901细胞生长及增加该细胞凋亡敏感性,livin可能成为胃癌凋亡治疗途径的一个分子靶点。