摘要：目的以检测出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7为目的,基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术,分别建立可视化RPA检测方法和实时荧光RPA检测方法。方法根据出血性大肠埃希菌O157:H7的rfbE基因设计引物和探针,进行特异性、灵敏度检测,建立实时荧光RPA检测方法。结合SYBR Green I在核酸反应中的颜色变化特征,设计可视化RPA检测方法。结果建立的实时荧光RPA检测方法和可视化RPA检测方法,分别在35℃时反应不超过25 min即可检测EHEC O157:H7。设计的引物和探针仅对EHEC O157:H7出现特异性结果。两种检测方法的检测限低于10-5 ng/μL。结论EHEC O157:H7的可视化RPA检测方法和实时荧光RPA检测方法操作简便,且特异性强、敏感性高,可为EHEC O157:H7的现场快速检测和实验室检测提供新方法。

摘要：本研究初步建立了寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)和基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)双重PCR检测方法,增加了寨卡病毒和基孔肯雅病毒核酸检测手段。利用寨卡病毒和基孔肯雅病毒NS3基因设计2组特异性扩增引物,并利用合成的NS3质粒验证引物,同时以寨卡病毒和基孔肯雅病毒cDNA为模板评价该方法的特异性和灵敏度。扩增寨卡病毒和基孔肯雅病毒cDNA,分别获得164 bp和230 bp的NS3基因片段,相应对照病毒均未发现164 bp或230 bp的扩增条带,提示寨卡病毒或基孔肯雅病毒NS3扩增序列与相应对照病毒无交叉反应,并且2种病毒双重检测的检测限均为120pg/μL。本研究建立的寨卡病毒和基孔肯雅病毒核酸双重检测方法虽然灵敏性较低,但特异性较好,可作为检测方法满足口岸寨卡病毒和基孔肯雅病毒核酸检测的需要。

摘要：针对集装箱内部的病媒生物探寻抓取问题,研制了一种用于集装箱病媒生物的探寻和抓取于一体的机器人系统。该机器人系统主要包括机械本体和远程控制系统组成,其中机械本体采用轮式结构,以实现机器人在大范围空间内的快速、灵活移动;机器人带有高清摄像和照明装置,能够快速探寻识别是否存活病媒生物,以对集装箱的熏蒸效果进行评价;机器人前端装有抓取机械手,在发现死亡病媒生物时,可将其可靠抓取。为验证所设计的机器人的功能,进行了实测应用,实测表明:所研制的探寻抓取机器人可快速探寻识别是否存活病媒生物,并能对其可靠抓取,能够有效提升集装箱通关处理效率。

摘要：目的构建高效表达结核分枝杆菌抗原肝素结合血凝素(HBHA)的重组耻垢分枝杆菌。方法针对结核分枝杆菌H37Rv株HBHA的编码基因Rv0475设计特异引物,利用PCR技术从细菌基因组中获取目的基因,并克隆入pET-30b(+)载体构建重组原核表达质粒pETHBHA,经IPTG诱导pETHBHA转化的重组*** BL21(DE3)细菌,Ni柱纯化携带C-端His标签的HBHA蛋白,并制备鼠源多克隆抗体。PCR扩增含自身启动子和调节序列的Rv0475基因并克隆入大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261,构建重组分枝杆菌表达质粒pMVHBHA,并经酶切鉴定证实后,电转化入耻垢分枝杆菌,涂布含卡那霉素的7H11平板,挑选抗性克隆并扩大培养,15%SDS-PAGE和Western blot鉴定重组耻垢分枝杆菌的表达。结果分别成功构建重组原核表达质粒pETHBHA和重组分枝杆菌表达质粒pMVHBHA;重组蛋白HBHA在大肠埃希菌中成功表达并纯化后,BCA蛋白浓度测定试剂盒测定浓度为1.912 5μg/μL,用其制备鼠源多抗;证实HBHA利用其自身的启动子和调节序列在重组耻垢分枝杆菌中表达。结论成功构建过表达HBHA的重组耻垢分枝杆菌,为研究该蛋白参与结核病的致病机制和研发新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。

摘要：常规呼吸道样本采样方式主要是口咽拭子、鼻咽拭子,口咽拭子需拭子棒接触咽后壁、颚扁桃体的充血部位;鼻咽拭子需拭子棒插入鼻腔,这两种方式均会引起受试者强烈的不适感,可能会对其造成一定的损伤。本研究设计的呼出气采集装备是一款通过采集检测对象呼出气病原微生物的装备,2 min内完成采样,检测对象可一次或多次吹气,装备显示屏可显示采样进度,进度条满格后则采样完成,具有操作简单、采集时间快、采集无创性、舒适度高、适用场景范围广、减少医护人员被动感染几率、适用于规模化采集等优点。呼出气和咽拭子采集样本中的新型冠状病毒核酸检测一致性为95.65%。呼出气采集装备的研发更新了呼吸道病原体采集的方法,为国境口岸出入境人员呼吸道传播疾病的多病共防提供了新的工具,为筑牢口岸卫生检疫防线提供了新的思路。

摘要：新冠肺炎疫情已经在全球流行两年。中国是全球最大的修船国,“后疫情”时代将有大批国际航行船舶进厂维修。本文通过分析在港维修船舶的特点,结合多地维修船舶检出新冠肺炎的案例,总结我国在港维修船舶检疫监管存在的问题,从明确顶层设计、落实主体责任、完善港口建设、发挥海关职能等方面提出对策建议,旨在夯实口岸公共卫生安全防线,助力我国修船产业发展。

摘要：针对传统集装箱病媒生物检测局限于人工检测的问题,设计了一款基于机器视觉的集装箱病媒生物视觉探寻系统.系统通过可遥控智能车采集实时视频以及抓取病媒生物的活动,进而通过深度学习和隔帧检测的方法识别遥控车回传视频中的病媒生物.系统以YOLOv5模型为训练核心,采用模块化结构,实现了集装箱病媒生物的视觉检测.利用机器视觉提高了检测效率,为进一步利用机器人检测病媒生物奠定了基础.

摘要：核酸序列依赖性扩增技术(nucleic acid sequence-based amplification,NASBA)是以PCR为基础发展的恒温扩增技术,操作简单、高保守性、高灵敏度、高特异性、引物设计简单、检测周期短和兼容性强,适用于RNA的扩增,能在2 h将单链RNA扩增约109倍,无需特殊设备。NASBA技术已广泛应用于呼吸道病毒、肠道病毒、食物传播病毒、免疫缺陷病毒和动物源性病毒等病原体的检测。本文就NASBA技术的检测原理、技术特点、扩增产物检测方法以及在蚊媒传染病检测中的应用做一总结。

摘要：目的 建立快速、特异、灵敏、便携的猴痘病毒(MPXV)多酶恒温快速扩增(MIRA)-Crispr/cas12a一步检测法。方法 选取MPXV F3L和G2Rcom、刚果分支(Ⅰ型)D14L和西非分支(Ⅱ型)G2Rcom基因为靶标,设计合成引物、crRNA及阳性质粒。基于含MPXV F3L和G2Rcom基因的阳性质粒,设置10^(6)、10^(4)、10^(3)、10^(2)拷贝/ml共4个浓度,利用MIRACrispr/cas12a技术建立荧光检测法并评价其灵敏性;以痘苗病毒、牛痘病毒、羊痘病毒、鼠痘病毒作为对照评价特异性;利用阳性质粒模拟临床样本验证建立的方法。基于Ⅰ型D14L和Ⅱ型G2Rcom基因的阳性质粒,建立Ⅰ型和Ⅱ型的MIRA-Crispr/cas12a荧光检测法,并在4种对照病毒的基础上,选用Ⅱ型或Ⅰ型作为对照进行特异性评价。建立MIRA-Crispr/cas12a可视化检测方法,利用侧向流试纸条直接判读结果。结果 MPXV F3L和G2Rcom、Ⅰ型D14L和Ⅱ型G2Rcom基因均得到特异性扩增。基于MPXV F3L和G2Rcom基因的方法灵敏性均为10^(3)拷贝/ml,灵敏性和特异性均较好;基于Ⅰ型D14L和Ⅱ型G2Rcom基因的方法特异性较好。模拟临床样本检测发现,基于MPXV F3L和G2Rcom基因的方法检出6份阳性模拟样本和2份阴性健康人咽拭子,与实时荧光PCR法的结果一致。基于MPXV F3L和G2Rcom、Ⅰ型D14L和Ⅱ型G2Rcom基因的可视化检测,在106拷贝/ml浓度时均显示两条带,10^(8)拷贝/ml均显示一条带。结论 建立的检测MPXV方法操作简单,一次开盖加样,灵敏性和特异性较好,可在30 min内完成检测,实现“样品进,结果出”,适用于MPXV的快速检测。

摘要：目的建立检测寨卡病毒的核酸序列依赖性扩增(NASBA)方法,满足口岸需要。方法根据寨卡病毒NS3基因设计并验证特异性扩增引物,建立NASBA方法。用登革病毒、基孔肯雅病毒、乙脑病毒、黄热病毒作为对照验证方法的特异性;用不同浓度寨卡病毒RNA进行NASBA扩增,确定方法的灵敏度。结果以寨卡病毒RNA为模板扩增获得NS3基因片段,序列分析未发现非特异性扩增。建立的NASBA方法只有寨卡病毒出现目的扩增条带,与对照病毒无交叉反应,最低检测限为1.2 pg/μl。结论建立的NASBA方法可以特异、准确地检测寨卡病毒RNA,可用于口岸寨卡病毒监测。