摘要：目的 建立一种快速、肉眼可观测的方法检测乙型肝炎病毒（HBV）基因型.方法 根据GenBank中已发表的明确HBV分型全序列,设计特异的引物和标记生物素探针,建立核酸试纸条法检测150例乙型患者和20例健康体检者的乙型肝炎基因型,同时采用荧光定量PCR法进行比较.结果 150例标本中B型检出率为34.00%（51/150）,C型占61.33%（92/150）,B/C混合型占4.00%（6/150）,未分型占0.67%（1/150）.与荧光定量PCR法进行比较,结果一致.结论 核酸试纸条法检测HBV基因型与荧光定量pCR法相比较灵敏度和特异性相似,但该方法更简便、快速,更适合临床开展.

摘要：目的建立一种快速、敏感度高的实时荧光环介导等温定量检测HIV-1DNA的方法。方法根据HIV病毒基因序列选择6个保守区域设计4条环介导等温扩增（LAMP）引物，建立环介导等温扩增体系，同时在体系中加入SYBRGreenI荧光染料，并评价该方法的特异性和敏感度。结果成功合成实时荧光环介导等温定量检测HIV-1DNA反应体系，检测200例HIV感染者外周淋巴细胞HIV．1DNA，其中有195例阳性，并检测50例健康对照结果均阴性。其中有HIV-1DNA定量结果显示最低含量为51拷贝／ml，最高含量为8．21x10^6拷贝／ml，平均值含量为5．78x10^5拷贝／ml，其中病毒含量比较集中在10^5数量级范围，共162例占83．08％。采用10倍稀释法发现该方法最低检出限为50拷贝／ml。对乙型肝炎病毒、疱疹病毒、丙型肝炎病毒进行交叉实验结果均为阴性。结论HIV感染者外周血中几乎都存在HIV-DNA，实时荧光环介导等温扩增是一种快速、敏感度高、特异性强的方法，适合各级医院的临床检测。

摘要：目的建立一种快速、准确、特异性高的方法检测手足口病病原体。方法根据引起手足口病常见致病原肠道病毒71（EV71）、柯萨奇病毒A16（CA16）及肠道病毒（EV），设计相应的引物、探针对35例临床诊断的手足口病患儿及20例正常健康婴儿的粪便进行EV、EV71、CA16三种病原体实时荧光RT-PCR检测，同时对55分标本进行EV71病毒培养分离。结果35例临床诊断手足口病患儿粪便中EV全部阳性，EV71阳性25例，CA16阳性8例，其中3例为EV71、CA16同时阳性，与临床诊断符合率为85．71％，20例健康体检婴儿粪便中EV病毒5例阳性，EV71、CA16均阴性。结论荧光RT-PCR对手足口病病原体检测准确性高、特异性强，具有快速、廉价等特点，适合于手足口病的早期诊断。

摘要：目的建立一种快速、灵敏度高、特异性强的核酸试纸条检测甲型H1N1流感病毒。方法根据2009年公布新型甲型H1N1流感病毒基因组序列设计合理的引物建立环介导恒温扩增体系,并在体系中加入含生物素的标记探针;在恒温下扩增45 min后产物与醋酸纤维棉片结合进行胶体金免疫试纸条显色反应,利用该方法检测76例确诊甲型H1N1流感病毒感染患者的咽部分泌物,同时采用卫生部公布的合格试剂盒进行对比试验。结果 76例确诊患者咽部分泌物经核酸试纸条检测全阳性,经对比试剂盒检测103拷贝/ml的标本进行10倍稀释后采用核酸试纸条检测结果仍能测出。结论核酸试纸条法检测甲型H1N1流感病毒具有快速、灵敏度高、特异性强的特点更适合于临床快速诊断。

摘要：目的:建立一种快速、准确检测T细胞受体重排删除环(TRECs)的方法,用来评价慢性乙型肝炎患者胸腺输出功能。方法:根据T细胞受体(TCR)基因序列设计引物与探针,建立TaqMan-MGB双标记探针技术定量测定外周血中TRECs的含量,通过重复性、敏感性、准确性实验评价该方法的可靠性;并将此技术应用于慢性乙型肝炎中型(CHB)患者中评价胸腺输出功能。结果:通过多次试验成功建立了检测TRECs含量的TaqMan-MGB双标记探针实时荧光定量检测方法,并对5×10~5copies的质粒进行10倍法稀释,最低检出可达50 copies;对6. 18 Lg copies/10~6PBMCs和3. 54 Lg copies/10~6PBMCs高低浓度标本同一批次进行25次检测结果平均值为6. 08±0. 14,3. 52±0. 18 Lg copies/10~6PBMCs批内变异系数分别为2. 26%,5. 12%,对这两份标本连续5 d重复20次试验结果平均值为6. 10±0. 23,3. 51±0. 22 Lg copies/10~6PBMCs批间变异系数分别为3. 85%、6. 27%;用双蒸水代替模板进行检测无目的基因扩增。35例健康成年人外周血TRECs平均含量为5. 62±1. 38 Lg copies/10~6PBMCs,45例同年龄段CHB患者外周血TRECs平均含量为4. 09±0. 97 Lg copies/10~6PBMCs,两者差异存在统计学意义(t=11. 25,P <0. 05)。结论:Taq Man-MGB双标记探针时荧光定量PCR技术检测TRECs特异性强,灵敏度高,重复性好;成年CHB中型患者外周血TRECs含量明显低于同龄健康人群,TRECs可用于CHB患者胸腺功能的评估。

摘要：目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)方法,检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)。方法根据基因库信息,以HSV-2的gG基因区为靶基因,设计合成引物和荧光探针。采用重组质粒构建标准品,优化反应体系进行方法学评价,同时对350例临床诊断HSV-2感染者和50例健康体检者的分泌物进行检测。结果成功建立了TaqMan技术的real-time PCR方法。通过反应体系优化重复性良好,批内变异系数CV=2.56%,批间CV=5.15%。特异性高,对乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒及解脲支原体、沙眼衣原体阳性标本进行检测无特异性扩增,灵敏度达到500拷贝。从350例临床诊断HSV-2感染者的分泌物中,检出HSV-2DNA 288例,检出率82.29%;50例健康体检者分泌物中未检出HSV-2DNA。结论 real-time PCR方法能够快速、准确地检出HSV-2DNA,其特异性强、灵敏度高,可用于临床诊断HSV-2感染。

摘要：目的:建立一种快速、廉价、特异性高、准确检测强直性脊柱炎(AS)患者人类白细胞抗原B27(HLA-B27)的方法。方法:选择人类白细胞抗原B27蛋白基因组保守区域设计上游引物,下游引物,优化PCR反应体系。对450例AS疑似标本和50例健康体检标本同时采用流式细胞技术(FCM)检测对照其结果进行方法学评价。结果:(1)成功的构建了PCR反应体系。(2)450例AS疑似标本聚合酶链反应(PCR)法检出HLA-B27阳性247例,阳性率54.89%,流式细胞技术检出HLA-B27阳性250例,阳性率55.56%,50例健康体检标本HLA-B27两种检测方法均为阴性。两者复合率达98%以上,对20例阳性标本进行多次PCR实验,重复性一致,未见批间和批内差异。(3)初步临床应用证实该方法结果准确、灵敏度高。结论:采用聚合酶链反应检测HLA-B27的方法灵敏度高、特异性强、操作简便、廉价、快速,更适合临床检验诊断的要求。

摘要：目的建立一种基于TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量PCR方法检测人类免疫缺陷病毒(human immanodeficiency virus,HIV-1)感染者外周血中HIV-1 DNA的含量。方法根据HIV-1病毒基因序列设计特异性引物和TaqMan-MGB荧光探针,建立TaqMan-MGB实时荧光定量PCR检测方法和定量标准曲线,优化反应方案,分析方法的灵敏度、准确性、重复性和精密度。采用该方法对20份HIV-1感染者和10份正常人的外周血进行HIV-1 DNA检测分析,并将结果与罗氏HIV DNA检测试剂盒作比较。结果成功建立了检测HIV-1 DNA TaqMan-MGB双标记探针实时荧光定量检测方法。灵敏度:该体系最低检出限可达10拷贝/ml,标准曲线方程为:Y=-3.339X+45.883,R^2=1。准确性:20份HIV-1阳性样本,HIV-1 DNA检出率100.00%,10例HIV-1阴性的健康对照,检测结果全部阴性;该检测结果与罗氏试剂盒检测结果完全一致。重复性和精密度:对高值(3×10~6拷贝/ml),低值(3×10~2拷贝/ml)2个浓度进行批内批间验证,批内CV分别为2.53%、3.02%;批间CV分别为2.87%,4.52%,均<10%。结论成功建立了HIV1-DNA的TaqMan-MGB荧光探针实时定量PCR方法;该方法具有较高的准确性、灵敏度以及精密度和重复性,能够为临床HIV1感染者提供早期诊断和治疗效果监测。

摘要：目的建立检测甲型H1N1病毒环介导等温扩增的方法（LAMP）。方法根据已公布的甲型H1N1流感病毒HA基因序列766—995bp的6个位点设计6条LAMP引物（2条内引物，2条外引物，2条环引物），优化并建立LAMP检测体系。并对36例确诊H1N1感染患者和20例健康体检者的咽式子同时采用实时荧光RT—PCR（Real—timeRT—PCR）和LAMP进行H1N1病毒核酸的检测。结果所建立的甲型H1N1病毒核酸LAMP反应体系具有良好的特异性，采用该体系检测结果与Real—timeRT—PCR检测结果一致，对H1N1核酸阳性的标本经LAMP扩增产物电泳图为阶梯状条带，健康对照标本未见条带产生。灵敏度试验，采用10^3复制的H1N1质粒进行10倍稀释后LAMP法仍能检出。特异性试验，20例体检标本经两种方法检测全阴性，对肺炎支原体和肺炎衣原体阳性标本采用该反应体系进行检测结果为阴性。结论甲型H1N1病毒核酸LAMP检测方法简便、快捷，对实验仪器设备要求不高，适合各级实验室和现场快速诊断使用。

摘要：目的建立一种在乙型肝炎拉米夫定治疗过程中产生的多聚酶酪氨酸(Y)-蛋氨酸(M)-天门冬氨酸(D)-天门冬氨酸(D)(YMDD主型区)基因变异的检测方法。方法设计包含两个变异位点(I/V)和无变异参照位点的3条下游引物,与同一条上游引物和探针建立3管PCR反应体系,对服用拉米夫定的100位患者的300份血清通过实时荧光PCR反应后的CT值判断是否发生已知(I/V)位点的变异。结果服药6个月检测未发现YMDD变异,服药9个月时检出YIDD变异5例,YVDD变异7例,YIDD/YVDD共同变异3例,变异率分别为5%、7%、3%。服药1年时检出YIDD变异10例,YVDD变异12例,YIDD/YVDD共同变异5例,变异率分别为10%、12%、5%,服药1年总变异率达27%。变异的发生与肝功能异常与HBVDNA病毒的反跳均相关(P<0.05)。结论该法对乙型肝炎拉米夫定治疗引起的基因变异检测方法简便、灵敏、快速、廉价,通过联合HB-VDNA与肝功能的检测对乙型肝炎患者的抗病毒治疗有重要临床意义。