摘要：目的建立一种快速简便的巢式聚合酶链式反应(PCR)法,以检测乳腺癌外周血循环癌细胞高表达基因角蛋白19(KRT19)。方法通过设计退火温度分别为72℃和60℃的内、外侧2对引物,在一个PCR反应体系中,同时加入0.2μmol/L外侧引物和20μmol/L内侧引物,使2轮PCR扩增反应一步完成。分别用建立的巢式PCR法与传统巢式PCR法检测30例乳腺癌患者和10例健康人外周血KRT19基因表达,比较其特异性;将肿瘤细胞系列稀释后分析两法的敏感性。结果建立的巢式PCR新方法与传统巢式PCR法在40份标本中均检出16份阳性,并都能检测到106稀释度中的肿瘤细胞,两法特异性和敏感性相同。建立的巢式PCR法所需的时间缩短了27min,且步骤简便。结论建立的巢式PCR法敏感、特异,且快速、简便,适用于临床快速检测。

摘要：背景：心房钠尿肽不仅存在于心脏且分布于全身许多部位，心房钠尿肽合成细胞在大鼠胃中形态学定位及在胃黏膜不同分区的分布特点仍处于研究阶段。目的：对心房钠尿肽合成细胞在大鼠胃中进行超微结构定位，观察其在胃不同区域的分布及形态。设计：重复测量实验。单位：承德医学院。材料：实验于2004-10／2007-07在承德医学院中药研究所免疫学实验室（省级重点实验室）完成，选用18只成年Wistar大鼠，体质量175-300g，雌雄不拘，由承德医学院实验动物科提供。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。实验用心房钠尿肽抗体及血清为美国Santa Cruz Biotechnology公司产品，胶体金标记抗体液（胶体金颗粒的直径为15nm，华美生物工程公司产品），CMTAS多功能真彩色病理图象分析系统由北京航空航天大学研制开发，日本产JEM-1200EX透射电镜。方法：大鼠经麻醉后，剪下胃及右心房（为心房钠尿肽抗体免疫组织化学染色时的阳性对照），沿大鼠胃贲门区、胃底区、幽门区的方向纵行取材。①将右心房作为阳性对照与胃组织在同一条件下进行免疫组织化学染色，观察心房钠尿肽在胃组织中不同部位的分布特点，确定心房钠尿肽合成细胞所在部位。②免疫电镜胶体金标记法对胃黏膜心房钠尿肽合成细胞的超微结构定位，采用CMTAS多功能真彩色病理图象分析系统对心房钠尿肽合成细胞细胞在不同的分布区域（贲门区、幽门区及胃底区）面密度的百分比。主要观察指标：胃心房钠尿肽合成细胞形态、所在部位及胃的不同分区面密度百分比。结果：①心房钠尿肽合成细胞形态及部位：阳性对照大鼠心房肌的心房钠尿肽合成细胞呈现阳性表达。大鼠胃中心房钠尿肽合成细胞也呈阳性表达，主要位于胃黏膜的下1／3。心房钠尿肽合成细胞的形态为圆形、锥体形和烧瓶型。阴性染色的部位为黏膜表层。黏膜下层和肌层。②心房钠尿肽合成细胞面密度的百分比：胃贲门区面密度的百分比最大，各面密度的百分比分布顺序是贲门区〉幽门区〉胃底区。结论：心房钠尿肽合成细胞主要位于胃黏膜的下1／3；大鼠胃不同分区心房钠尿肽合成细胞的面密度的百分比不相同，以胃贲门区最大。

摘要：背景:研究证实心房钠尿肽受体在大鼠胃的不同分区其分布密度不尽相同,其可抑制大鼠、豚鼠和人胃平滑肌的自发性收缩。目的:探讨心房钠尿肽合成细胞在大鼠胃黏膜的超微结构定位及与微血管密度的相关关系。设计:单一样本观察。单位:承德医学院附属医院。材料:清洁级成年雄性Wistar大鼠18只,体质量300～350g。方法:实验于2004-10/2007-07在承德医学院中药研究所免疫学实验室完成。用包埋后免疫胶体金标记的电镜技术对大鼠胃黏膜心房钠尿肽-合成细胞进行超微结构定位,用组织化学藏红花-甲苯胺蓝染色对心房钠尿肽-合成细胞进行标记,同时用单宁酸-氧化铁和扫描电镜技术对大鼠胃黏膜的微血管进行观察。主要观察指标:①心房钠尿肽合成细胞的在大鼠胃内的超微结构定位。②微血管在大鼠胃黏膜的分布特点。③心房钠尿肽合成细胞的在大鼠胃黏膜的分布。④心房钠尿肽合成细胞与胃黏膜中微血管分布的相关关系。结果:①大鼠胃黏膜心房钠尿肽-合成细胞超微结构定位:证实心房钠尿肽-合成细胞为胃黏膜的肠嗜铬细胞。②大鼠胃黏膜的微血管观察结果:在胃黏膜的不同切面上微血管在腺体间弯曲走行在不同的切面上显示出三维结构,在胃黏膜的基底部微血管的密度最大。③心房钠尿肽合成细胞的在大鼠胃黏膜的分布:证实肠嗜铬细胞是胃黏膜的唯一嗜铬细胞,胞浆内有棕色颗粒,而在黏膜下和肌层中没有这种细胞分布,肠嗜铬细胞在不同的分布区域其分布密度不相同,分布密度最大在贲门区,其次是幽门区和胃底区,其分布密度排列顺序依次是:贲门区>幽门区>胃底区。④心房钠尿肽合成细胞与胃黏膜中微血管分布的相关关系:在大鼠胃贲门区两者呈正相关(r=0.53,P0.05,n=18);在胃底区亦没有相关关系(r=-0.29,P>0.05,n=18)。结论:心房钠尿肽-合成细胞是胃黏膜的肠嗜铬细胞,心房钠尿肽-合成细胞和微血管在大鼠胃贲门区二者呈正相关,而在幽门区和胃底区没有相关性。

摘要：背景:肝纤维化的发展伴随诸多的形态学和机能学的改变,二甲基亚硝胺所致的大鼠肝纤维化模型病变类似于人类肝纤维化病变。目的:观察二甲基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化发生过程中形态学与血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原含量的动态变化。设计:随机对照动物实验。单位:延边大学医学院病理教研室实验室。材料:选用80只3月龄Wistar雄性大鼠,清洁级,体质量175～200g,由延边大学医学院动物中心提供。试剂:二甲基亚硝胺美国Sigma公司产品,α-平滑肌肌动蛋白为Dako公司产品,天狼猩红(Siriusred)为Aldrichchem公司产品,血清透明质酸、层粘连蛋白和Ⅳ型胶检测试剂盒为华美生物工程公司产品,兔抗鼠的一抗为Dako,Denmak生物公司的产品。仪器:日本产JEM-1200EX透射电镜;日本产酶联免疫检测仪;北京航空航天大学研制开发的CMTAS多功能真彩色病理图象分析系统。方法:实验于2004-06/2005-12在延边大学医学院完成。摸球法随机将大鼠分成2组。模型组(n=40):给予腹腔注射10g/L二甲基亚硝胺(10μL/kg),1周连续注药3d(1次/d),持续4周;对照组(n=40):在同一时间段内注射同样剂量的生理盐水;分别在实验开始7,14,21,28d处死大鼠,处死前左心室取血,血清样品被冷冻在-70℃的低温冰箱中备实验用,处死后取其肝组织用于光镜和电镜的样品制备。①用ELISA法测定在肝纤维化形成过程中血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原含量的动态变化。②采用苏木精-伊红染色、组织化学的天狼猩红染色观察肝纤维化形成过程中组织形态学变化及对肝纤维化分级(肝纤维化程度分为0～4级,0级:没有肝纤维化;1级:汇管区有纤维化;2级:汇管区与汇管区之间形成纤维间隔;3级:肝小叶中出现纤维间隔,并且肝的正常结构出现病理改变;4级:形成肝硬化),同时计算胶原纤维的面密度。③采用透射电镜技术、免疫组织化学的α-平滑肌肌动蛋白染色观察肝星状细胞的转化情况及分布特点。④对肝纤维化形成过程中胶原纤维面密度的百分比与血清透明质酸、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白含量的相关分析。主要观察指标:①肝纤维化形成过程中血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原含量的变化。②肝纤维化形成过程中形态学变化、肝纤维化的分级情况及胶原纤维的面密度。③肝星状细胞的转化情况及分布特点。④肝纤维化形成过程中胶原纤维面密度的百分比与血清透明质酸、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白含量的相关分析结果。结果:纳入80只大鼠,实验组34只造模成功,与对照组40只全部进入结果分析。①模型组第7天至28天血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原含量明显高于对照组(P<0.05),其中第28天增加程度最大。②模型组汇管区在腹腔注射二甲基亚硝胺后第7天出现出血坏死,第14天仍可在汇管区观察到出血、坏死,并且还可见较薄的纤维间隔,第21和28天可见较厚的纤维间隔;模型组大鼠腹腔注射二甲基亚硝胺后第7,14,21,28天胶原纤维面密度的百分比明显高于对照组(P<0.05),其中第28天增加的幅度最大;对照组大鼠纤维化病理分级与模型组大鼠各时间点相比差异显著(P<0.01),模型组大鼠的第7天较第14,28天组有明显差异(P<0.01)。③a-平滑肌肌动蛋白染色有阳性细胞出现,并且在这一阶段在电镜下观察到正处在“转化的肝星状细胞”;模型组第21和28天,在电镜下观察到典型的成纤维细胞。④胶原纤维面密度的百分比与血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原含量呈正相关(r=0.707,0.675,0.662,P<0.01)。结论:二甲基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化发生过程中,在不同时间段内形态学与血清标志物透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原呈动态变化,并且在不同的时间段内胶原纤维面密度的百分比与血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原含量呈正相关。

摘要：背景:作者前期研究证实心房钠尿肽和5-羟色胺共同存在于胃肠嗜铬细胞的同一分泌颗粒中,那么心房钠尿肽对5-羟色胺的合成与分泌是促进还是抑制,目前仍处于研究阶段。目的:通过模拟胃黏膜内分泌和腔分泌心房钠尿肽来证实对胃肠嗜铬细胞中5-羟色胺合成与分泌的影响。设计:随机对照动物实验。单位:承德医学院免疫学实验室。材料:实验于2004-10/2007-07在省级重点实验室承德医学院免疫学实验室完成。选用40只雄性成年Wistar大鼠,由承德医学院实验动物科提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。实验用心房钠尿肽、5-羟色胺抗体为美国Santa Cruz Biotechnology公司产品。方法:随机将40只大鼠均分至内分泌和外分泌2个平行实验中,各分为对照组10只和实验组10只。通过胃腔直接注射心房钠尿肽(28μg14mg/L)模拟外分泌产生的心房钠尿肽,通过舌下静脉注射心房钠尿肽14μg,14mg/L)模拟内分泌产生的心房钠尿肽;并以免疫组织化学,透射电镜的超微结构的测量学的方法和高压液相色谱电化学检测的方法对心房钠尿肽刺激后胃内5-羟色胺免疫反应细胞和内分泌颗粒的数量及血清中的5-羟色胺含量,与注射生理盐水的对照组进行对比。主要观察指标:模拟胃黏膜内分泌和腔分泌心房钠尿肽对胃内5-羟色胺免疫反应阳性细胞密度、分泌颗粒的数密度及血清中的5-羟色胺的影响。结果:模拟心房钠尿肽外分泌和内分泌对大鼠胃内5-羟色胺分泌的影响:与对照组相比,胃内5-羟色胺免疫反应阳性细胞密度及分泌颗粒的数密度显著增多(P<0.05),血清中的5-羟色胺含量显著减少(P<0.05)。结论:外分泌和内分泌的心房钠尿肽对5-羟色胺的释放均有明显的抑制作用。