摘要：目的 :将体外筛选具有切割内皮素 - 1(endothelin- 1,ET- 1) m RNA的 10 - 2 3脱氧核酶转染原代培养新生大鼠心肌细胞 ,观察其对心肌细胞 ET- 1m RNA的影响。 方法 :体外转录 ET- 1全长 RNA底物 ,设计并合成 5条 ET- 110 - 2 3脱氧核酶(DZ1～ DZ5 ) ,其 5′及 3′端各有 2个核苷酸硫代修饰 ,体外切割 ET- 1RNA底物 ,筛选有效脱氧核酶 ;5′标记荧光素 FAM的10 - 2 3脱氧核酶瞬间转染新生大鼠心肌细胞以观察对 10 - 2 3脱氧核酶的摄取 ;采用半定量 RT- PCR检测 ET- 1基因的表达。结果 :DZ2、DZ3、DZ4及 DZ5在体外均可切割 RNA底物 ,其中 DZ4两侧结合区结合自由能之差最大 ,其切割效率最高 ,达83.5 % ,而 DZ3两侧结合区结合自由能之差最小 ,其切割效率亦最低 (4 7.3% ) ;瞬间转染新生大鼠心肌细胞 2 4 h,心肌细胞内可见 10 - 2 3脱氧核酶的分布 ,半定量 RT- PCR结果显示转染 2 4 h后的 DZ4 (0 .2 μmol/ L)可减少血清诱导肥大心肌细胞 ET- 1m RNA及细胞总蛋白 ,降低细胞活力与蛋白质合成速率 (P<0 .0 5 )。 结论 :本研究设计的 10 - 2 3脱氧核酶能切割体外转录的ET- 1全长 RNA底物 ,转染心肌细胞后 ,可抑制 ET- 1m RNA的表达 ,减缓血清诱导心肌细胞肥大 ,10 - 2

摘要：目的 :应用内皮素 (endothelin ,ET) 110 2 3脱氧核酶抑制内源性ET 1表达 ,探讨内源性ET 1在急性缺血性心律失常发生中的作用。方法 :设计并合成ET 110 2 3脱氧核酶 ,作体外切割筛选 ;SD大鼠静脉注射ET 110 2 3脱氧核酶 ,观察心肌对 5’标记荧光素FAM的ET 110 2 3脱氧核酶的摄取和对其后离体灌流大鼠心脏左冠状动脉前降支结扎致急性缺血性心律失常的影响。结果 :设计合成的ET 110 2 3脱氧核酶在体外高效切割ET 1RNA底物 ;荧光标记ET 110 2 3脱氧核酶静脉注射 4h后 ,大鼠心肌组织内荧光广泛分布 ;静脉注射ET 110 2 3脱氧核酶4h后 ,左冠状动脉前降支结扎引起的急性缺血性心律失常显著减轻 ,并呈剂量依赖性 ,而对照序列无此效应。结论 :本实验设计的ET 110 2 3脱氧核酶能有效切割ET 1RNA ,减轻急性缺血性心律失常的发生 ,证明内源性ET 1在急性缺血性心律失常的发生中起重要作用。