摘要：目的用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac■baculovirus expression systems, Bac-to-Bac BES)表达人3型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3, HPIV-3)的重组融合蛋白(fusion protein, F),并研究密码子优化、疏水性区域、SUMOStar融合标签及gp67分泌信号肽对目的蛋白表达的影响,同时研究F蛋白的抗原性与免疫原性。方法全基因合成HPIV-3 F蛋白昆虫细胞密码子优化基因序列,设计特异性引物,经PCR扩增获得HPIV-3全长优化型F基因(op-F)、去除N端和C端疏水区域的截短优化型F基因(opt-F)和截短野生型F基因(wtt-F);将以上基因分别构建至pFastBac1、pI-SUMOStar、pI-secSUMOStar 3种载体,采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对各目的基因对应的蛋白进行表达。利用SDS-PAGE、Western blot等方法对各目的蛋白的表达及特异性进行检测。用纯化的重组opt-F蛋白免疫青紫蓝兔,制备F蛋白特异性抗体。结果 ①对HPIV-3的opt-F基因及wtt-F基因的表达对比显示,opt-F基因在3种载体中都得到了良好表达,而wtt-F基因在3种载体中均未表达,说明密码子优化对目的基因的表达具有重要作用;②对HPIV-3的op-F基因及opt-F基因在pFastBac1载体中的表达对比显示,opt-F基因得到了良好表达,而op-F基因未表达,说明疏水性区域可显著影响目的基因的表达;③对HPIV-3的opt-F基因在pFastBac1及pI-SUMOStar载体中的表达对比显示,SUMOStar融合标签可使opt-F基因的表达量明显提高;④对HPIV-3的opt-F基因在pI-SUMOStar及pI-secSUMOStar载体中的表达研究显示,添加gp67分泌信号肽后未检测到opt-F基因的可溶性表达,说明gp67信号肽对目的蛋白无促可溶性表达效果。⑤纯化的opt-F/pI-SUMOStar蛋白免疫青紫蓝兔,得到了滴度为1∶8 192的抗血清。Western blot显示,此血清可以特异性结合HPIV-3病毒的F蛋白。结论密码子优化、N/C端疏水区域的去除以及SUMOStar融合标签的嵌合,可以显著提高F蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达。

摘要：给排水施工时常面临着复杂的施工环境,在承载能力有限的地质条件下放坡开挖困难重重。沉井结构在给排水领域应用广泛,灵活运用沉井结构能够解决大深度施工难题,适应特殊地质条件、节约施工空间。为了确保工程质量安全,有必要对沉井结构进行科学设计。本文讨论分析了沉井的构造要求及设计要点,并结合新溪污水处理厂工程,对承载力及下沉进行验算,以期为给排水沉井结构的方案制定提供参考。

摘要：用心发现生活中的点滴之美。泰戈尔有一篇散文《美》,将其对美的理解表达得淋漓尽致。根植于灵魂深处的丰富且充满内涵的美的灵魂,一双发现美的眼晴,一颗热爱美的心灵,可以挖掘出平凡且平淡的尘埃中隐藏着的绽放的美好,美便可以无处不在。让我们以更加敏锐的眼光去发现美,以更加深入的思考去理解美,体会背后的管理艺术、人生哲学和人性光辉。

摘要：目的利用TaqMan实时荧光RT-PCR(real-time RT-PCR)技术建立测定人3型副流感病毒培养物滴度的方法。方法根据人3型副流感病毒HN基因的保守序列设计引物及探针,采用10倍系列稀释的体外转录HN RNA为模板,建立定量标准曲线。验证方法的专属性、敏感性、重复性,并对人3型副流感病毒的病毒培养液滴度进行检测。结果建立的方法对HN RNA标准品的检出灵敏度为4.7 copies/μL,标准曲线相关系数为0.998,扩增效率为105%。标准品的实验内重复性CV均<0.50%,实验间重复性CV<3.60%。系列稀释HNRNA标准品在低温(-80℃)下保存3年后,所测标准曲线的斜率和截距差异均无统计学意义(P=0.673)。用该方法对人3型副流感病毒分离株LZ17、LZ1501和LZ1728进行检测,结果均为阳性,3个病毒分离株滴度检测重复性CV均<10.00%;对7种呼吸道非人3型副流感病毒病原体检测均为阴性,表明该方法具有很高的专属性、敏感性和重复性。结论建立的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR技术可以快速、准确地对人3型副流感病毒滴度进行检测。

摘要：硬件结构及电子设计的质量是决定FPGA性能的两个重要因素。针对这两个方面,提出了一种通用的FP-GA芯片I/O互连结构,利用"回线"的终端互补原理对各种互连线的悬空终端进行连接。根据所提出的I/O互连结构的特点,在较少编程点的前提下,减少传输管级联个数,对多路选择器和缓冲器进行优化,提出了一种节省芯片面积且速度较快的基于MUX-Buffer结构的布线开关。该结构已在FPGA芯片中实现,对I/O互连的仿真及测试结果表明,所提出的结构及电路实现具有很好的延时可预测性,与常规MUX结构相比,面积-延时乘积降低了10%左右。

摘要：介绍了加掺合料喷射混凝土配合比的一般设计方法及步骤,从理论上分析了硫酸盐腐蚀环境中通过加掺合料的方式对喷射混凝土配合比进行优化的可行性,并通过试验研究了双掺粉煤灰和硅灰对喷射混凝土凝结时间和早期强度的影响。结果表明:以10%的粉煤灰+5%的硅灰双掺等量取代水泥,其凝结时间、强度增长等性能均能满足施工及设计承载力要求。

摘要：本文着重介绍了利用永宏 FBs 系列可编程控制器实现自动三维弯管机控制系统的设计。重点阐述了该系统的工作原理、硬件结构和软件设计,实践证明该弯管机系统实用性强、使用方便。

摘要：本文着重介绍了一种用EATEK PLC实现全自动包装机位置和时间控制的方法，以及通过HITECH人机界面实现参数设定，系统控制和状态显示，实现了馐机全自动控制的目的。

摘要：本文在介绍了城市经贸网的对于经贸网信息化建设的背景需求。阐述了经贸网络平台的建设总体规划，及Domino/Lotus Note的说明和在系统中的应用。并且对经贸网功能模块特点的分析和设计。

摘要：本文介绍了永宏PLC和TVF2000变频器等组成的污水处理系统,用MODBUS实现PLC与多台变频器的通讯控制,以及对系统的控制功能及实现作了主要描述。