摘要：目的应用软件和在线网络分析EgG1Y162的氨基酸序列,了解其理化性质及二、三级结构特点;预测该抗原的T、B细胞表位,筛选优势表位并将其与热休克蛋白HSP70进行联合重组表达,验证该新型多表位疫苗刺激机体产生的免疫反应。方法通过NCBI检索获取EgG1Y162和HSP70的氨基酸序列,利用Protparam、NetPhos、TMHMM-2.0等在线程序分析EgG1Y162蛋白的分子质量、等电点、氨基酸组成、跨膜结构域、磷酸化位点,预测其二、三级结构及T、B细胞表位。结合预测结果优化确定最终的表位信息,将优化的优势表位信息与HSP70分子对接,构建重组HSP70-EgG1Y162,通过酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测对比分析HSP70蛋白、EgG1Y162和HSP70-EgG1Y162诱导产生的免疫反应强度。结果预测EgG1Y162蛋白由120 aa组成,HSP70由762 aa组成。在线分析EgG1Y162蛋白的二级结构中α-螺旋约占22.50%,延长链约占28.33%,β-转角约占6.67%,无规则卷曲约占42.50%。筛选EgG1Y162抗原的优势T、B细胞表位,然后以HSP70蛋白为载体与EgG1Y162抗原T-B细胞联合表位及连接蛋白Linker-GGGS构建HSP70-EgG1Y162多表位疫苗,免疫小鼠后取脾细胞进行ELISPOT检测,反应斑点的灰度值较对照组显著增高,即HSP70-EgG1Y162具有免疫原性。结论生物信息学方法分析预测细粒棘球绦虫EgG1Y162蛋白含有丰富的T、B细胞表位,筛选的优势表位与热休克蛋白HSP70融合后能够增强该新型包虫多表位抗原的免疫原性,ELISPOT证实以HSP70蛋白和EgG1Y162构建的HSP70-EgG1Y162多表位疫苗免疫原性增强,该设计方法有望成为设计优势疫苗的一种新方法,为包虫病的预防提供新思路。