摘要：为建立伯氏考克斯氏体(Coxiella burnetii,Cb)微滴式数字PCR(Droplet Digital PCR, ddPCR)检测方法,研究以Cb IS1111基因为靶基因,并针对基因保守区域设计了特异性引物和探针,以使反应的条件更加完善,从而构建了ddPCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性及重复性作出了评估。结果显示,所采用的ddPCR方法最低可检测的浓度为0.52 copies/μL,敏感性较高;与动物布鲁氏菌、牛结核分枝杆菌、土拉杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌无交叉反应,特异性强;组内重复和组间重复变异系数均小于10%,重复性好。使用本实验建立的方法检测了42份疑似感染的临床样品,检测结果与荧光PCR鉴定结果一致。表明建立的ddPCR方法的特异性强、敏感性高、重复性和准确性好,可用于Cb的快速检测和精准定量,对Cb感染的防控具有重要意义。

摘要：为分析羊种布鲁氏菌双精氨酸转运系统(twin-arginine translocation system,Tat system)毒力相关底物蛋白L,D-转肽酶ErfK诱导宿主产生的免疫应答情况,首先对布鲁氏菌M28毒株ErfK基因序列(WP_002963714.1)进行生物信息学分析,参考序列设计引物,构建表达载体pET-30a(+)-ErfK,经IPTG诱导表达、亲和层析和镍柱纯化获得目的蛋白;利用SDS-PAGE和Western blot对重组ErfK(rErfK)蛋白进行抗原性鉴定;将rErfK蛋白免疫小鼠,分别在免疫后15、30和45 d收集血清和脾脏,检测蛋白免疫后小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答情况。生物信息学预测结果显示,ErfK蛋白无跨膜结构,为亲水性蛋白,有多个T细胞和B细胞抗原表位;SDS-PAGE和Western blot均可获得25 kDa的蛋白条带,重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生反应,证明rErfK有良好的抗原性;小鼠免疫试验结果显示,rErfK组小鼠脾脏CD8^(+)T细胞含量相比PBS组显著上升(P<0.05),且脾脏Th1型细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4转录水平均显著上升(P<0.05),此外,rErfK免疫也能极显著诱导小鼠血清中总IgG和特异性IgG的产生(P<0.01)。上述结果表明,经大肠杆菌表达的布鲁氏菌rErfK蛋白可诱导小鼠产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。本研究为基于ErfK蛋白的布鲁氏菌病诊断试剂和亚单位疫苗研发提供了参考依据。

摘要：聚合酶螺旋反应(polymerase spiral reaction,PSR)是基于环介导等温扩增技术(LAMP)和聚合酶链式反应(PCR)建立的一种新型恒温体外核酸扩增技术,其利用混合引物的设计思路和BstDNA聚合酶的链置换活性,实现了在体外等温条件下的核酸扩增,表现出灵敏性及特异性较PCR显著提高,引物设计较LAMP简单等优点,在保证检测灵敏、特异的同时,耗时相对较短,且操作简便,对仪器设备要求低,可肉眼直观判定结果,特别适用于公共卫生、动物健康、食品安全和生物防御等领域的快速诊断。本文介绍了PSR技术的原理及其在病原微生物检测方面的应用,以期为相关领域的检测技术研究提供参考。

摘要：采用Plackett-Burman设计结合Box-behnken响应面法优化杨树花多糖的超声提取工艺。以杨树花多糖得率为考察指标，对影响杨树花得率的超声功率、超声频率、提取温度、提取时间、提取次数、液料比、颗粒大小、醇沉时间、醇沉浓度等9个因素，采用Plackett-Burman设计从中筛选出具有显著效应的因素一超声功率、提取温度、提取时间；进一步以杨树花多糖得率为考察指标，采用Box-behnken设计响应面法对以上三个因素进行考察，确定最佳工艺条件为：超声功率195W，提取温度66℃，提取时间43min，以此条件提取的多糖含量为63．18±1．57mg／g，与理论预测值仅相差2％～3％。

摘要：为了解决传统公路路线设计的平纵面设计数据、二维和三维设计图各自孤立的问题,以某道路工程设计为例,依据公路路线设计的流程和规范,采用Bentley公司的OpenRoads Designer软件平台,在分析设计资料和标准的基础上,从地形建模、路线方案比选阶段开始,通过对路线平面和纵断面的联动设计,创建路基横断面模板,生成三维廊道,对路基、路面、填挖方量等工程量进行计算及分析,探索基于BIM技术的公路路线设计、三维建模的方法,提高设计效率,为BIM技术在公路路线设计阶段的应用提供参考。

摘要：从某型号大型空气舵舵体的结构和工艺性分析入手,通过制定合理的加工工艺方案,设计制作专用装夹工装,研究适合产品加工特征的数控编程方法,并运用虚拟仿真技术,有效解决了大型空气舵舵体的加工难题,实现了产品的高精数控加工。

摘要：以舱体中较为典型的贮箱支架为大型回转体薄壁支架类零件的代表,对其变形原理以及加工过程中的振动现象进行了分析。通过在工艺路线的安排、加工余量的划分及切削用量的选择和工艺装备的设计等方面采取相应的措施,有效地减小了零件变形,避免了加工过程中的刀具振动,保证了零件的加工精度和加工可靠性。