摘要：本研究建立1种基于TaqMan探针的实时荧光环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)(TaqMan—LAMP)检测方法,用于肉制品中鸭源性成分的快速鉴别。以鸭线粒体cytb基因的保守序列设计特异性引物,优化并建立基于TaqMan探针的实时荧光LAMP检测方法,对该方法进行特异性、灵敏度试验;同时与《GB/T38164—2019常见畜禽动物源成分检测方法 实时荧光PCR法》作比较,对市售肉制品进行检测,验证本方法的准确性。所建立的TaqMan-LAMP检测方法特异性强,仅鸭肉基因组DNA呈现特异性扩增曲线,30 min内完成检测,灵敏度为0.001%(w/w),重复性好,批次内变异系数CV为1.99%,对47份肉制品进行检测,检测结果与国标法相比,相对敏感性、特异性和符合率均为100%。本研究建立的鸭源性成分TaqMan-LAMP检测方法检测快速、特异性强、灵敏度高、重复性好,适用于肉制品中鸭源性成分的快速检测。

摘要：建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)、鲤疱疹病毒3(CyHV-3)、鲤鱼浮肿病毒(CEV)和病毒性神经坏死病病毒(VNNV)等4种鱼类常见病毒的环介导等温扩增技术(LAMP)联合检测方法。基于4种鱼类病毒的基因保守区分别设计LAMP引物组,优化反应体系和条件,筛选测试出特异性和灵敏度最佳的引物组,建立4种鱼类常见病毒的联合检测LAMP方法,同时以市售的荧光定量检测试剂盒测试结果作为对照,评估建立的联合检测LAMP方法的准确性。结果显示,筛选出的SVCV、CyHV-3、CEV和VNNV的LAMP引物组特异性均良好,优化后的体系反应条件均为63℃,60 min,其中SVCV和CyHV-3均可检测到10 fg/μL,CEV和VNNV可检测到1 fg/μL。应用建立的4种病毒联合LAMP检测方法和市售的各荧光定量PCR检测试剂盒对150份收集的组织样本进行平行测试,联合LAMP检测方法的准确率为100%。建立的鱼类病毒LAMP联检方法能够准确、高效、快速地在鱼类组织样本中同时对SVCV、CyHV-3、CEV和VNNV进行检测,适合水产养殖现场检测,对病毒的监测和快速诊疗起到重要作用。