摘要：【目的】明确新疆南疆地区养殖猪群中是否存在PCV-2感染及感染的PCV-2 ORF2基因特征。【方法】根据Gen Bank登录的PCV-2基因序列,设计合成1对引物,针对新疆南疆地区疑似PCV-2感染病例进行ORF2基因PCR扩增、电泳分析、胶回收、测序及序列分析。【结果】PCV-2-XJ株ORF2基因长为702 bp,编码233个氨基酸,与国内外参考毒株核苷酸同源性为89.7%~96.6%,与国内外参考毒株氨基酸同源性为87.6%~95.7%,与中国大多数毒株在一个进化分支内,氨基酸序列一些区域或位点发生了变异。【结论】新疆南疆存在猪感染PCV-2,PCV-2-XJ株ORF2基因序列与中国目前存在的多数毒株相近。

摘要：目的 构建6种转录本人早幼粒细胞性白血病(human promyelocytic leukaemia,hPML)基因的真核表达质粒,并分析其重组蛋白的亚细胞定位情况。方法 根据GenBank中登录的hPML基因序列设计引物,RT-PCR法扩增获得6种转录本hPML基因片段(hPMLⅠ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ),分别连接至真核表达载体pCAGGS,获得6种转录本hPML基因的真核表达质粒。将6种真核表达质粒分别转染293T细胞,Western blot法检测蛋白表达情况;分别转染至Vero细胞,间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)法检测亚细胞定位情况。结果 6种真核表达质粒中的目的基因片段均与GenBank中登录的hPML基因序列一致。6种重组蛋白均可与Myc抗体发生特异性结合,其中重组蛋白hPMLⅠ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ定位于细胞核及细胞质内,重组蛋白hPMLⅦ主要定位于细胞质,极少定位于细胞核中。结论构建的6种转录本hPML基因真核表达质粒均可在哺乳动物细胞中正确表达,表达的重组蛋白同时定位于细胞核及细胞质或主要定位于细胞质中。本研究为重组蛋白hPML抗病毒等生物学功能的深入研究提供了实验依据。

摘要：为了获得羊痘病毒γ干扰素受体(interferon-γreceptor,γ-IFNR)基因,用绵羊睾丸细胞培养山羊痘病毒疫苗株G14-STV44-55,提取其基因组为模板,设计γ-IFNR基因特异性引物并进行PCR扩增,将其产物克隆至pGEM-T Easy载体,并进行了测序和序列分析。电泳结果显示,扩增出了2 600 bp左右的DNA片段;测序结果表明,成功克隆了γ-IFNR基因,其大小828 bp,基因内存在一个PmeⅠ单一酶切位点,在编码区有早期转录终止信号TTTTTN(T)T;核苷酸和氨基酸同源性分析表明,弱毒疫苗株G14-STV44-55γ-IFNR基因与基因BANK中发表的8个参考毒株的同源性在92%和89%以上,说明羊痘病毒γ-IFNR基因具有较高的保守性。

摘要：根据已发表的牛病毒性腹泻病毒基因1型(BVDV-1)和2型(BVDV-2)5'非编码区(5'-UTR)的序列,分别设计了针对BVDV-1型、BVDV-2型以及针对BVDV-1和BVDV-2两型的特异性引物和通用引物,以标准参考株BVDV-1NADL株和BVDV-2890株为对照,建立了分别能检测BVDV-1、BVDV-2和BVDV-1/BVDV-2的RT-PCR检测方法。在此基础上,进一步对疑似BVDV-2感染牛的临床病料组织(脾、淋巴结、心肌、血液等)检测结果表明,在所检测的18份样品中,BVDV-2阳性8份(44%)。经RT-PCR鉴定为阳性的组织病料,进一步通过MDBK细胞进行病毒分离,病毒分离率为100%;结合感染细胞病变观察,间接免疫荧光试验RT-PCR和序列测定鉴定,所分离的病毒均为BVDV-2。上述研究表明,该RT-PCR检测方法敏感、特异;并证实我国牛群已存在BVDV-2的污染或感染。