摘要：目的比较研究轻度和经典方法诱导的大鼠慢性压迫性神经损伤(chronic constriction injury,CCI)模型的成模特点,为基础研究实验设计提供参考。方法将18只8周龄SD雄性大鼠随机分为假手术组、Minor CCI组和经典CCI组,每组6只。于坐骨神经结扎铬制可吸收外科缝线,Minor CCI组结扎1根,经典CCI组结扎4根。3组动物于造模前和造模后7、14、21、28 d检测机械缩足反射阈值、热缩足反射潜伏期和累积疼痛评分变化情况。透射电镜观察坐骨神经超微结构变化情况。结果Minor CCI组和经典CCI组机械缩足反射阈值和热缩足反射潜伏期痛敏趋势一致,Minor CCI组累积疼痛评分较经典CCI组低。Minor CCI组造模后出现痛敏,造模后14 d进入平台期,约10 d,各症状逐渐恢复;经典CCI组造模后出现痛敏,造模后14 d进入平台期,造模后28 d痛敏依然稳定甚至出现进一步敏化。Minor CCI组和经典CCI组坐骨神经超微结构变化一致,均表现为髓鞘结构破坏、崩脱,形成髓鞘球、自噬体等。结论Minor CCI模型更稳定,痛敏症状可维持至造模后28 d,基本无自残现象,适用于短期实验设计,可最大程度减小实验动物的痛苦。经典CCI模型痛敏症状持久,造模后28 d依然处于平台期,但自残现象明显,适用于中、长期实验设计。

摘要：目的利用分子克隆技术构建36型腺病毒(Ad36)腺病毒基因早期转录区4可读框基因1(E4ORF1)重组原核表达质粒pET30a-E4ORF1,经诱导表达后,制备并纯化获得E4ORF1抗原,经免疫兔后获得多克隆抗体。方法根据NCBI数据库中人Ad36基因组全序列,设计引物、PCR扩增其中的E4ORF1基因全长并将其克隆至原核表达载体中、测序。将测序正确的原核表达质粒pET30a-E4ORF1转化至***21(DE3)菌株中,通过探索E4ORF1蛋白的最佳诱导条件后,对重组蛋白进行大量诱导表达和纯化。将纯化获得的重组蛋白免疫新西兰白兔,在5次免疫后分离血清,ELISA检测抗体效价。抗原亲和纯化出E4ORF1多克隆抗体,Western blot法检测抗体的特异性。结果成功扩增E4ORF1基因,经测序比对与GenBank序列一致,大小为408 bp,证明成功构建原核重组表达质粒。经鉴定重组蛋白的相对分子质量(M_(r))约14000,ELISA检测5次免疫后兔血清抗体效价达1∶320000。Western blot法证明该抗体具较高的特异性。结论成功表达E4ORF1蛋白,并制备了高特异性的兔抗E4ORF1多克隆抗体。

摘要：目的运用序列特异性引物PCR技术(SSP-PCR)研究基因单核苷酸多态性。方法根据GenBank中人脂联素基因(APM1)序列及SNP信息,利用Primer5.0设计引物,通过PCR技术检测APM1的SNPs。结果建立并优化了序列特异性引物PCR(SSP-PCR)技术,并可快速、直观、准确地进行基因分型。结论改良的SSP-PCR技术是一种特异性更高、操作简便的SNP检测方法。

摘要：目的探讨石榴皮乙醇提取物浸膏对糖尿病大鼠的降糖、调脂效果。方法雄性SD大鼠随机分为空白对照组(10只)和实验组(42只)。对照组仅用普通饲料喂养,实验组高糖高脂饲料喂养4w,给予链脲佐菌素(STZ)45mg/kg,腹腔注射,建立2型糖尿病大鼠模型。72h后空腹血糖≥11.1mmol/L确定为糖尿病模型。成模大鼠随机分为罗格列酮组和石榴皮乙醇提取物低、中、高剂量组,干预4w后观察提取物对大鼠血糖和血脂水平的影响。结果模型组大鼠血糖升高,从生化指标方面证实造模成功。石榴皮乙醇提取物中、高剂量组能有效地降低糖尿病模型动物血清中胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)水平,高剂量组还能有效降低糖尿病模型动物血糖水平。结论通过高糖高脂喂养联合腹腔注射STZ成功复制出了2型糖尿病大鼠模型;石榴皮乙醇提取物对糖尿病大鼠具有较好的降糖、降脂效果。