摘要：CRISPR系统作为一种基因编辑工具,自2013年首次应用于哺乳动物以来,凭借其设计简单,耗时短,效率高的优点,在短短四年间飞速发展,其应用已经远远超过了锌指核酸酶和转录激活因子样效应物核酸酶技术,并在分子生物学领域得到广泛应用。基于该系统发展而来的各项技术不断的被发掘,小鼠作为一种基本的实验动物,在CRISPR系统应用中扮演重要角色。目前基于CRISPR系统发展而来的应用工具已经成功的作用于各种体外培养的细胞,通过对胚胎细胞的编辑而产生动物模型的技术也在不断成熟,以及在疾病治疗特别是遗传病治疗中也展现出其独有的优势,并且其作用范围在不断的扩展,作用方式还在不断的创新。主要介绍CRISPR系统的结构与作用原理,讲述基因敲入、基因敲除、基因沉默、转录调控等作用于DNA的几种主要的CRISPR应用工具,针对目前主要的缺点即脱靶效应所研究出的几个改善措施,以及在小鼠疾病模型建立与疾病治疗中发挥的重要作用。

摘要：设计并验证能够靶向切割PLIN1基因的sgRNA,为建立高效的PLIN1基因敲除动物模型奠定基础。利用预测软件设计3条评分较好的sgRNA。添加T7启动子后体外转录相应的sgRNA,构建酶切体系并验证其体外切割活性。构建相应的基因敲除质粒载体,通过电转染将质粒转到3T3-L1前脂肪细胞内并进行诱导分化。RT-PCR法检测细胞中PLIN1 mRNA的表达,Western blot法检测细胞中PLIN1蛋白的表达。成功在体外转录3条PLIN1的sgRNA并构建酶切体系,测得sgRNA-PLIN1-1的切割效率为61.8%±9.0%,sgRNA-PLIN1-2的切割效率为64.1%±9.6%,sgRNA-PLIN1-3的切割效率为34.1%±7.2%,sgRNA-PLIN1-3组的切割效率明显低于sgRNA-PLIN1-1组和sgRNA-PLIN1-2组(P<0.05)。成功构建3条sgRNA的质粒载体并电转染进入3T3-L1前脂肪细胞内,转染效率约为30%。诱导分化的第4天,各阳性干扰组PLIN1 mRNA的表达量显著降低(P<0.01);与sgR NA-PLIN1-3组相比,sgRNA-PLIN1-1组和sgRNA-PLIN1-2组PLIN1 mRNA的表达量有显著性差异;各阳性干扰组PLIN1蛋白的表达量显著降低(P<0.01),阳性干扰组相互之间PLIN1蛋白的表达量无显著性差异。3条sgRNA皆可以靶向切割PLIN1基因的2号外显子,其中gRNA-PLIN1-1组和sgRNA-PLIN1-2组的切割活性略高于sgRNA-PLIN1-3组。体外活性切割实验可以很好的预测细胞内切割效果,是筛选高活性sgRNA的有效手段。

摘要：利用CRISPR/Cas9技术构建纯合围脂滴蛋白(Plin1)基因敲除小鼠模型,并初步分析其表型。针对Plin1基因2号外显子前后序列设计sgRNA并构建表达载体,体外转录获得sgRNA后与Cas9蛋白混合,显微注射至小鼠受精卵中并进行胚胎移植。出生小鼠经测序及PCR基因型鉴定获得F_(0)代阳性小鼠;令F_(0)代小鼠与野生型小鼠杂交,获得F_(1)代杂合子小鼠;通过F_(1)代杂合小鼠近交,获得F_(2)代纯合子小鼠模型。常规饲喂同窝别Plin1基因敲除纯合小鼠、杂合小鼠和野生型小鼠,并测量小鼠体重、身长等体格参数;定量实时聚合酶链反应(Q-RT-PCR)和蛋白质印迹(WB)分别检测每个组织中Plin1基因在mRNA和蛋白质水平的表达。敲除了小鼠Plin1基因741 bp的片段(包含了2号外显子在内);Plin1基因敲除小鼠PLIN1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);常规喂养4周后,相比于野生型及杂合型小鼠,纯合型Plin1基因敲除小鼠体重显著降低(P<0.05)。成功构建了Plin1基因敲除小鼠模型;初步表型分析发现,Plin1基因敲除小鼠与野生型小鼠相比较为瘦弱。

摘要：目的掌握山西省农村少儿的体格发育状况和地区间的差异。方法采用自行设计的《农村少儿健康状况调查问卷》对山西省长治、晋中、临汾、吕梁、运城五地市共1 949名农村少儿进行问卷调查。所得数据使用SPSS 11.5软件包建立数据库并进行统计分析处理。结果山西省五地市农村少儿营养状况分为较差、一般、中等、良好的各占0.62%、7.34%、35.30%、56.75%,男女良好比例分别为29.66%及27.09%;营养状况处于较差、一般、中等的男性略高于女性;营养状况良好者在3-6岁占5.49%,7-10岁占21.24%,11-14岁占27.81%,15-17岁占2.21%;运城地区营养状况较其他四地区处于较高水平,吕梁地区则反之。男女性少儿脊柱畸形发生率分别为2.36%、2.47%;各年龄段中,处于3-6岁、7-10岁、11-14岁的畸形发生率较高,分别为2.40%%、2.33%、2.64%、而15-17岁的发生率则为0.00%;临汾地区畸形发生率较其他4地市为高,为8.44%。山西省农村少儿患病率最高,是广东省富裕地区的9.48倍。扁平足的发病率为6.52%,其中男性的发病率为7.08%,女性发病率为5.84%。结论山西省五地市农村少儿体格发育状况待进一步提高。

摘要：目的构建有效针对小鼠黑色素浓集激素受体1(melanin-concentrating hormone receptor 1,MCHR1)的shRNA(small hairpin RNA)真核表达载体。方法设计合成3条小鼠MCHR1基因的shRNA序列以及1条无同源性的shRNA序列作为阴性对照,与质粒重组构建sh-MCHR1干扰载体,并进行菌液PCR和DNA测序鉴定;脂质体法转染小鼠3T3-L1细胞后观察MCHR1 mRNA和蛋白表达的变化。结果经菌液PCR及DNA测序鉴定表明各shRNA载体构建成功;转染3T3-L1细胞后,与空载体组相比,阴性对照组MCHR1 mRNA和蛋白的表达均无明显差异,但实验组3种干扰载体均能显著抑制MCHR1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),且3种载体的抑制程度有一定的差异,以sh-MCHR1-1载体沉默效果最佳。结论 sh-MCHR1干扰载体构建成功,为进一步探究MCHR1与肥胖症之间的关系奠定了实验基础。

摘要：提出了一种新型的Intranet资源整合及共享机制。使用Peer-to-Peer和Agent技术构筑一个实时、高效、智能的供Intranet资源发布、共享与下载的软件平台,最大化地整合了Intranet内部的资源并实现了智能共享,使用户得以用最少的时间搜寻到所需要的资源,并以最快的速度完成下载。该资源共享平台可使Intranet资源使用效率更高,用户共享更加方便,搜索和下载更加迅速,网络负荷更加均衡。该文讨论了共享平台的设计和实现的关键技术。

摘要：目的探讨手术日选择在唇腭裂临床路径设计中的意义。方法收集甘肃省8家医院近3年唇腭裂手术治疗患者病历资料,采用病历综合分析和住院日频数分析方法,分析手术日选择对临床路径设计中确定住院天数策略的影响。结果甘肃省唇腭裂手术治疗患者平均住院天数为11天,手术多在住院后第6天(均数)进行。术前5天中主要医嘱为术前检查类项目。术后实际治疗天数仅为5天,主要医嘱类项目包括术后护理、膳食与抗生素治疗。结论手术日选择分析策略对临床路径设计中确定实际住院天数具有重要意义。

摘要：采用改动微机联锁程序、设计控制电路等方法,将自动防溜车脱轨技术与微机联锁系统相结合,应用在莱钢编组站翻车机线路上,有效预防了溜车事故的发生。