摘要：背景：内皮祖细胞在贴壁分化过程中其干细胞标记以及内皮细胞表型的变化过程将有助于了解内皮祖细胞的分化特性。但目前还未找到区别于成熟内皮细胞特异性的细胞标记。目的：观察大鼠外周血单个核细胞外分化为内皮细胞的过程中干细胞标志物以及内皮细胞表型的变化。设计、时间及地点：细胞观察实验,于2004-06/2008-12在青岛市市立医院心脏外科实验室完成。材料：抽取雄性SD大鼠外周血,应用Ficoll密度梯度离心的方法获得单个核细胞。方法：单个核细胞体外培养于纤连蛋白处理的培养皿中,同时应用血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导,使之向内皮细胞转化。主要观察指标：以免疫组织化学方法检测细胞CD31、CD34、Flk-1、vWF在第1-7天的表达。结果：贴壁细胞的CD31、CD34、Flk-1、vWF在不同时段呈不同程度的表达。干细胞标志物CD31、CD34在培养的第2天开始表达,第4天最强,以后逐渐减弱,第6天消失。而Flk-1在第3天开始表达,以后逐渐增强,第7天时最强。vWF表达是逐步出现的,第7天时表达为100%。结论：大鼠外周血干细胞向内皮祖细胞分化的过程中,干细胞标志物逐渐消失,内皮细胞的表型逐步出现。

摘要：背景:血管脱细胞组织基质作为天然生物支架材料的制备与临床应用具有一定的时差,保存条件对其影响逐渐收到人们重视。目的:拟观察不同液氮保存时间对脱细胞血管基质支架材料组织形态及力学特性的影响。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2007-08/2008-05在青岛市市立医院心脏外科实验室完成。材料:健康新西兰兔10只,体质量550~600g,用于制备脱细胞血管基质。方法:采用胰蛋白酶、低渗溶液、化学除垢剂法处理兔胸主动脉制备脱细胞血管基质。根据液氮保存时间的不同将制取的血管随机分为液氮1月组,液氮2月组和液氮3月组;另设新鲜组:未用液氮保存而作为对照。主要观察指标:苏木精-伊红染色、扫描电镜观察各组脱细胞血管基质形态变化,并作力学测试,包括Lagrange应变、Lagrange应力、伸长比和极限应力。结果:苏木精-伊红染色可见新鲜组血管脱细胞组织基质中胶原纤维和弹性纤维保持原来的形态和结构,呈网状排列,细胞已基本去除。液氮保存组光镜下见与新鲜组无明显差异。扫描电镜见新鲜组血管脱细胞组织基质的纤维结构完整,胶原纤维无断裂,为网状和多孔状,孔径为(100~150)×(10~20)μm。液氮保存组胶原纤维结构完整,呈网状排列,胶原纤维无断裂现象,孔径与新鲜组无明显差异。各组力学指标相比,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:不同液氮保存时间对脱细胞血管基质的形态学、组织学以及力学特性方面没有明显影响。

摘要：背景:目前脱细胞血管基质的制备方法有酶消化法和去污剂法。十二烷基硫酸钠为离子型去垢剂,脱细胞效果强,但易引起较多蛋白纤维损伤,影响血管的结构和力学特性。Triton X-100为柔和的非离子型去垢剂,两者联合应用可减少纤维损伤。目的:采用酶、非离子型和离子型去垢剂联合法制备猪脱细胞血管基质,并检测其生物学性状。设计、时间及地点:对比观察的细胞学实验,于2007-08/2008-05青岛市市立医院心脏中心实验室完成。材料:雄性幼猪1只,取其胸主动脉用于制备脱细胞血管基质。方法:采用含双抗的0.125%胰蛋白酶、1%Triton X-100、1%十二烷基硫酸钠逐步处理猪胸主动脉。主要观察指标:苏木精-伊红染色观察细胞脱除情况。扫描电镜、透射电镜观察细胞脱除情况及胶原纤维和弹性纤维情况。测定脱细胞血管基质中胶原蛋白含量,检测血管脱细胞血管基质的伸长比、极限应力。结果:经该法处理的猪血管内细胞全部脱除,胶原纤维、弹性纤维无断裂,细胞外基质保持完好,其胶原蛋白含量和力学性状与新鲜组织无明显差别。结论:酶、非离子型和离子型去垢剂联合法是制备脱细胞血管基质的较好方法,制备获得的脱细胞血管基质生物学性状保持良好。