摘要：【目的】建立稳定性好、可重复性强、多态性扩增效果好的‘库尔勒香梨’SCoT-PCR反应体系,证明SCoT分子标记可以用于梨属植物优良营养系的鉴定。【方法】以新疆库尔勒农二师29团、33团和34团的‘库尔勒香梨’优良营养系为试材,通过L25(56)正交试验设计对‘库尔勒香梨’SCoT-PCR反应体系进行筛选,并对扩增反应程序进行优化,运用正交设计直观分析法和正交设计助手Ⅱ软件对正交设计扩增结果进行分析,从筛选出的20个引物中随机选择2条引物对24份材料扩增,用DNAMAN、Editseq、ORF Finder和NCBI-BLAST-tblastx对测序结果分析。【结果】优化后的香梨SCoT-PCR 20μL反应分析体系含(2.5 mmol·L^(-1)10×buffer with Mg^(2+))2.5μL、Taq酶1.5 U、引物10μmol·L^(-1)、模板DNA25 ng、dNTPs 1.6 mmol·L^(-1)。反应程序为94℃预变性4 min;94℃变性1 min,52℃退火45 s,72℃延伸1 min,30次循环;72℃延伸8 min。对测序结果分析表明:扩增产物的大小为200~2 000 bp,23份材料与对照材料存在单碱基的缺失,利用单碱基变异可以区分出24份材料,说明18份优良营养系材料发生了遗传变异。【结论】SCoT分子标记可用于梨树营养系变异的鉴定。

摘要：土壤源热泵将30—300m深的土壤、沙石、卵石、含水层、及岩石的地层作为热泵系统的“蓄热体”，夏季供冷时将热泵机组排放的“冷凝热。储存在该层土壤中，冬季供暖时再由热泵机组从该层土壤中取出来。这种循环回用能源的方式，环保、节能，在我国的发展前景很好，潜力很大。土壤源热泵空调系统与传统空调系统的最大不同就在于其地热换热器，地下换热器的设计合理与否直接影响到地源热泵空调系统的性能。

摘要：【目的】明确'库尔勒香梨'kfpMYB基因表达高低与萼片脱落和宿存的相关性。【方法】在新疆库尔勒巴格吉格代村梨园于盛花期选取强势树和弱势树各3株,各采30朵花的萼片,共180朵。同时每株树上各标记100朵花,落花7 d后进行调查,记录萼片的宿存与脱落情况。参照艾德莱植物RNA快速提取试剂盒的说明书提取总RNA。以总RNA为模板,按照TakaRa PrimescriptTMRT reagent Kit试剂盒的说明书合成'库尔勒香梨'cDNA第一条链。根据cDNA序列信息设计引物,通过实时荧光定量PCR明确kfpMYB基因在强势树与弱势树中的相对表达量,并用SPSS软件分析田间调查的数据。【结果】kfpMYB基因在强势树2～5序位萼片中的表达量均高于弱势树。kfpMYB基因在强势树和弱势树第2序位的表达量显著高于其他序位的表达量。强势树和弱势树的第2、3序位的宿萼率均显著高于第4、5序位,第5序位的脱萼率显著高于其他序位。不同树势中'库尔勒香梨'萼片kfpMYB基因相对表达量高低与萼片脱落和宿存有相关性,但不显著;在不同序位中,第4序位中'库尔勒香梨'萼片kfpMYB基因的相对表达量与萼片宿存呈显著负相关,第5序位中'库尔勒香梨'萼片kfpMYB基因的相对表达量与萼片脱落呈显著负相关。【结论】'库尔勒香梨'萼片kfpMYB基因的表达量与萼片的脱落和宿存存在相关性,不同树势中的相关性不显著,但在不同序位中存在显著相关。

摘要：用苹果的叶片作为材料,研究比较了两种提取苹果总RNA方法的效果,确定了较好的提取方法。根据苹果茎沟病毒外壳蛋白基因设计引物,通过RT-PCR扩增在苹果叶片总RNA样品中获得了524 bp的特异片断,通过对该片段的序列分析与苹果茎沟病毒外壳蛋白基因源序列比较,其同源性高达93%。通过多次重复实验验证,该方法能很好地检测苹果茎沟病毒。

摘要：将轴压传感器、高精度拉绳式位移传感器、无线数据采集终端组成监控系统,根据工况合理布点,监测高支模关键点的模板沉降、立杆轴力以及立杆倾斜等参数,综合分析,达到及时预警、预防事故发生目标。

摘要：【目的】研究库尔勒香梨萼片脱落、宿存与kfpSPL基因之间存在的关系,并克隆该基因及其启动子。【方法】以库尔勒香梨花器官作为材料,库尔勒香梨kfpSPL基因的cDNA序列以及梨基因组信息为模板设计引物,通过PCR获得该基因及其启动子,进行上游调控序列顺式作用元件的预测分析(PLACE数据库和Plant Care数据库)。【结果】克隆获得kfpSPL基因的基因组DNA序列长度为3 320 bp和2 332 bp的上游启动子调控序列,kfpSPL基因的基因组DNA与Pyrus bretschneideri数据库中的一段长度相同的序列具有99%的同源性,E值为0,并发现该基因有三段内含子,将克隆得到的启动子序列在梨全基因组序列数据库中进行相似性搜索,发现克隆得到的上游启动子序列的1～796 nt和1 042～2 332 nt分别与scaffold291.0中290 783～289 988 nt和289 990～288 701 nt的同源性为96%和97%,E值均为0。以生物信息学分析为依据,kfpSPL启动子序列中存在一些相关的调控元件,赤霉素响应元件GARE-motif、P-box,光响应中的顺式作用元件ACE、Box Ⅱ、CATT-motif、G-box、TCT-motif、Box 4,防御和应激反应中的顺式作用元件TC-rich repeats,启动子和增强子区的共同顺式作用元件CAAT-box等,转录起始的核心启动子元件TATA-box等。【结论】kfpSPL基因启动子序列中存在与赤霉素、脱落酸、水杨酸等激素相关的顺式作用元件,不同生长调节剂处理脱萼果和宿萼果的花器官可以调控kfpSPL基因的表达水平。

摘要：【目的】利用5条引物目的片段进行扩增,完成PRINS检测中引物及其退火温度的测定。【方法】采用确认带有ASPV的库尔勒香梨叶片,以叶片为试验材料,并采用经RT-PCR检测技术健康香梨的叶片作为阴性对照。引物采用NCBI提供的BLAST工具中的ASPV病毒的全基因组序列的外壳蛋白的保守区域进行设计。并根据PRINS特有的性质及ASPV病毒有片断相互重叠现象来设计相应的引物。【结果】这5条引物之间没有太多的干扰,且都在目的区域出现了比较清晰的条带。【结论】证明所设计引物可以在进一步的PRINS检测ASPV病毒时直接使用,为PRINS在梨树病毒检测方面发挥更大的作用奠定了基础。

摘要：目的:建立适合果树病毒检测的高效RNA提取方法。方法:以梨、苹果幼嫩叶片及韧皮部为材料,利用已有的和自行设计的RNA提取方法,研究了苹果褪绿叶斑病毒和苹果茎痘病毒RT-PCR检测的效果。结果:自行设计的方法能在1h内获得纯度高、含量多、完整性好的总RNA,并能很好地用于RT-PCR扩增,扩增产物经回收、克隆和测序,证实是检测病毒的特异条带。结论:经反复多次实验证实,该方法适合果树RNA的快速提取,操作简便、快捷,可大大缩短RNA的提取时间,降低提取成本,适合大量样品的提取检测,可广泛用于各种果树病毒的研究。

摘要：为明确库尔勒香梨萼片脱落和宿存与kfpMYB基因表达的关系,以其花器官为材料,根据库尔勒香梨kfpMYB基因c DNA序列及梨基因组信息设计引物,通过PCR获得了该基因长度为1 659 bp的基因组DNA序列和2 440 bp的上游调控序列,利用PLACE和Plant Care数据库进行启动子顺式作用元件的预测分析。生物信息学分析表明,kfpMYB启动子序列中存在一些与激素调节相关的元件,如脱落酸响应顺式作用元件ABRERATCAL、DPBFCOREDCDC3和EBOXBNNAPA,赤霉素信号抑制因子WRKY71OS、GARE-motif和TATC-box,生长素诱导有关元件NTBBF1ARROLB和TGA-element。利用实时荧光定量PCR检测了不同生长调节物质处理对kfpMYB转录水平的影响,实时荧光定量PCR分析结果表明ABA、ETH、GA、NAA和果树促控剂(PBO)对kfpMYB的表达均有不同程度的影响,说明这些调控元件参与了基因的表达。

摘要：利用自行设计的方法分离提取总RNA,通过一对特异引物,分别扩增出不同梨树品种上苹果锈果类病毒(ASSVd)的特异片段,经由回收、克隆和测序,有10条序列已在GenBank(EU031467-EU031476)登录,利用克隆的ASSVd质粒,通过RT-PCR合成了生物素标记的cDNA探针,建立了斑点杂交检测技术。在此基础上以已知带有苹果锈果类病毒的库尔勒香梨和无类病毒梨树叶片为材料,利用DIG标记,研究了梨树类病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括SuperScriptⅡ浓度、4种碱基混合物(dNTPs)、RNA酶抑制剂(RNasin)及互补引物浓度对cDNA合成的影响,退火温度、LA Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。研究结果表明:RNasin的用量大于0.2U/μL时,信号强度随着RNasin量的加大而增强;只有当dNTPs浓度达0.4mmol/L时才能生成一定量的cDNA;SuperScriptⅡ浓度在0.5￣1.3U/μL均可进行正常的逆转录,而且在该范围内产物的量随SuperScriptⅡ浓度提高而增多;引物浓度达到0.9μmol/L以上时才能进行有效的逆转录,并且生成的cDNA的量随引物浓度增大而增加。原位扩增ASSVd的cDNA适合退火温度为62℃。循环30￣35次可出现较强的蓝色信号,引物浓度在0.8￣1.2μmol/L时显色较好;LA Taq酶浓度为0.004U/μL以上,均显示较深的蓝色;Mg2+浓度为1.5mmol/L就可满足原位PCR所需。