摘要：背景:有实验表明,促红细胞生成素对视网膜的光化学损伤有保护作用,该作用与光化学损伤视网膜色素上皮细胞中半胱天冬酶-3表达的变化有关?目的:采用光刺激诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡,观察不同剂量促红细胞生成素对细胞半胱天冬酶-3表达的影响。设计:观察对比实验。单位:青岛大学医学院。材料:成人视网膜色素上皮-19细胞株购自美国细胞培养收集公司。DMEM/F12混合培养基、新生牛血清、胰蛋白酶购自GIBCO生物技术公司。重组人促红细胞生成素购自Sigma生物技术公司。人半胱天冬酶-3定量EIA试剂盒购自上海西唐生物科技有限公司。半胱天冬酶-3单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司;PV6001免疫组织化学试剂盒和DAB显色试剂盒购自北京中山生物技术公司。方法:实验于2006-05/2007-01在青岛大学医学院病理生理教研室完成。取成人视网膜色素上皮-19细胞株传代培养的2～5代细胞建立光损伤模型,传代细胞随机分为7组,每组4孔,①正常对照组:不加光照,不加促红细胞生成素药物干预。②光损伤模型组:光照12h,不加促红细胞生成素药物干预。③光损伤+10000 U/L促红细胞生成素组、光损伤+20000 U/L促红细胞生成素组及光损伤+40000 U/L促红细胞生成素组:光照12h,分别加10000、20000及40000 U/L促红细胞生成素。④光损伤+40000 U/L促红细胞生成素组+AG490组:光照12h,加促红细胞生成素40000 U/L及Jak2激酶抑制剂50000 U/L。⑤光损伤+40000 U/L促红细胞生成素组+蛋白激酶B特异性抑制剂组:光照12h,加促红细胞生成素40000 U/L及蛋白激酶B特异性抑制剂100μmol/L。主要观察指标:采用酶联免疫吸附实验和免疫组织化学法定量检测不同含量促红细胞生成素干预治疗前后视网膜色素上皮细胞半胱天冬酶-3表达的变化。结果:正常对照组半胱天冬酶-3无明显表达;光损伤模型组半胱天冬酶-3表达于视网膜色素上皮细胞核上,呈大量特异性黄色着色;光损伤不同剂量促红细胞生成素组半胱天冬酶-3表达的特异性黄色着色随促红细胞生成素含量增加而减弱,以光损伤+40000 U/L促红细胞生成素组最弱光损伤+40000 U/L促红细胞生成素组+AG490组半胱天冬酶-3呈强阳性表达,光损伤+40000 U/L促红细胞生成素组+蛋白激酶B特异性抑制剂组半胱天冬酶-3表达仍呈阳性,但较光损伤模型组稍弱。结论:重组人促红细胞生成素可减少视网膜色素上皮细胞的光损伤后半胱天冬酶-3的表达。重组人促红细胞生成素抗光损伤诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡作用机制之一可能是抑制半胱天冬酶-3的表达。

摘要：目的探讨视网膜母细胞瘤（RB）中乙酰肝素酶（HPSE）、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达及其与血管内皮生长因子（VEGF）、微血管密度（MVD）的关系。方法应用免疫组织化学法检测34例RB石蜡标本及10例正常视网膜组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达，用CD34抗体进行肿瘤血管内皮染色，计数肿瘤微血管密度（MVD）；应用RT—PCR检测18例RB组织中HPSEmRNA、HIF-1α mRNA、VEGFmRNA的表达，分析RB组织中HPSE、HIF-1α、VEGF表达情况及其与肿瘤微血管形成、临床及病理特征的关系。计量资料采用成组设计定量资料t检验、方差分析和q检验；计数资料采用X^2检验、Fisher检验及秩和检验；相关性采用Spearman等级相关分析及kappa检验。结果34例RB石蜡标本中HIF—1α、VEGF阳性表达率为58．8％、64．7％，明显高于正常对照组（X^2=10．784，P〈0．05；X^2=9．269，P〈0．05）。18例RB中HPSE、HIF-1α、VEGFmRNA阳性率为55．6％、44．4％、72．2％，与正常组比较有统计学意义（X^2=8．642，P〈0．05；X^2=6．222，P〈0．05；X^2=9．956，P〈0．05）。HIF-1α、VEGF与MVD的表达呈正相关（r=0．664，P〈0．05；r=0．590，P〈0．05）；RB中HIF-1α mRNA、HPSEmRNA表达与VEGFmRNA表达呈相关性（Z=2．350，P=0．009；Z=2．940，P=0．002）。结论HIF-1α、HPSE可共同作用于VEGF这种促血管生成重要因子，在肿瘤血管形成中起一定作用。

摘要：目的探讨促红细胞生成素对过氧化氢氧化损伤人视网膜色素上皮细胞的保护作用及其机制。方法采用600μmol.L-1的过氧化氢造成体外培养的人视网膜色素上皮细胞氧化损伤模型。实验设计分为5组:对照组,过氧化氢模型组,过氧化氢+10 kIU.L-1EPO组,过氧化氢+20 kIU.L-1EPO组和过氧化氢+40 kIU.L-1EPO组。MTT法检测细胞活性,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞法测定细胞的凋亡率。结果过氧化氢模型组RPE细胞的活性明显降低,不同浓度的EPO药物干预组的细胞活性较模型组明显升高,并随着EPO浓度的升高而升高。过氧化氢模型组RPE细胞SOD活性降低,MDA的含量增加;而EPO药物干预组SOD活性较模型组明显升高,MDA含量减少,差异有显著性。过氧化氢模型组RPE细胞的凋亡率升高,而不同浓度的EPO药物干预组降低RPE的凋亡率,凋亡率随着EPO浓度的升高而降低。结论促红细胞生成素对过氧化氢诱导的人RPE细胞的氧化损伤有保护作用,其机制可能与抑制氧化反应、提高抗氧化酶活性、减少细胞凋亡有关。

摘要：背景:碱性成纤维细胞生长因子是一种具有广泛神经活性的多肽生长因子,能保护神经元,促进神经生长。有证据证实碱性成纤维细胞生长因子可治疗视网膜缺血再灌注损伤。目的:建立视网膜缺血再灌注损伤动物模型,分析碱性成纤维细胞生长因子对其视网膜细胞凋亡及调控基因蛋白表达的影响。设计:随机分组,验证性实验。单位:青岛大学医学院附属医院眼科。材料:实验于2002-04/2003-12在青岛大学医学院眼科病理研究室完成。选择健康Wistar大鼠28只,随机取4只作为正常对照组,其余24只大鼠的左眼作为生理盐水对照组,右眼作为碱性成纤维细胞生长因子组。方法:生理盐水对照组、碱性成纤维细胞生长因子组采用前房加压法制作大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型。生理盐水对照组从玻璃体腔注入生理盐水12μL,碱性成纤维细胞生长因子组从玻璃体腔注入碱性成纤维细胞生长因子12μL,4只/次。正常对照组不给药。分别于缺血1h再灌注1,6,12,24,48,72h6个时间点采用原位缺口末端标记、免疫组织化学染色检测凋亡细胞的表达,计算凋亡指数。主要观察指标:①各组大鼠再灌注后不同时间点视网膜组织原位凋亡细胞检测结果。②各组大鼠再灌注后不同时间点视网膜组织中Fas、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-2的表达。结果:①缺血再灌注大鼠不同灌注时间下视网膜组织凋亡指数的比较:正常对照组大鼠视网膜中未见凋亡细胞。与生理盐水对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子组于缺血1h再灌注1,6,12,24,48,72h6个时间点凋亡指数均明显降低,且再灌注12,24,48h时差异显著(t=5.362～5.595,P<0.05)。②缺血再灌注大鼠不同灌注时间下Fas表达的变化:正常对照组大鼠视网膜中几乎无Fas表达。与生理盐水对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子组于缺血1h再灌注1,6,12,24,48,72h6个时间点Fas表达均明显降低,且再灌注6,12,24h时差异显著(t=3.954～9.327,P<0.05)。③缺血再灌注大鼠不同灌注时间下半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-2表达的变化:正常对照组大鼠视网膜中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-2蛋白不表达。与生理盐水对照组比较,碱性成纤维细胞生长因子组于缺血1h再灌注6,12,24,48,72h半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-2表达均明显降低(t=4.125～15.641,P<0.05)。结论:碱性成纤维细胞生长因子可显著抑制凋亡基因Fas及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-2在视网膜缺血再灌注损伤中的表达,从而减少神经节细胞凋亡,对视网膜缺血再灌注损伤起到治疗作用。

摘要：背景:研究发现,低氧诱导因子1α不仅与缺氧的生理反应有关,而且还参与了正常的胚胎发育过程。目的:观察大鼠发育过程中视网膜低氧诱导因子1α的变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-01/09在青岛大学医学院山东省分子病毒重点实验室完成。材料:成年未经产清洁型Wistar大鼠,体质量200～250g。方法:雌鼠和雄鼠1∶1合笼,制成孕鼠。分别于孕12,16,20d时剖腹取胎,获得各阶段的鼠胚。出生后大鼠按日龄分别于1,5,10d和12个月龄麻醉处死后摘除眼球,分离视网膜及制作石蜡切片。主要观察指标:免疫组织化学方法、半定量反转录-聚合酶链反应检测大鼠视网膜在胚胎发育过程中各时间段低氧诱导因子1α蛋白及低氧诱导因子1αmRNA的表达。结果:胚胎期视网膜神经上皮层及色素上皮层均有低氧诱导因子1α阳性表达,生后发育早期视网膜神经上皮层及色素上皮层也可见低氧诱导因子1α阳性表达,以神经节细胞、内网层更明显,随着发育进展,其阳性表达主要位于视网膜节细胞层。大鼠视网膜低氧诱导因子1α蛋白及mRNA的表达为胚胎期最高、生后发育期逐渐下降、成年期最低,3期之间相比,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:大鼠发育过程中视网膜低氧诱导因子1α随着发育的进展逐渐降低,并逐渐集中表达于视网膜节细胞层。