摘要：目的 探讨针对survivin基因的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）对人肺癌A549、宫颈癌Hela S3及急性髓系白血病K562细胞株的效应,筛选有效的siRNA序列.方法 设计并合成3条针对survivin基因的siRNA,通过Hiperfect脂质体转染试剂分别转染A549、Hela S3及K562细胞,培养48 ～ 72 h后,用SYBR Green Ⅰ的实时定量PCR （RT-PCR）方法检测肿瘤细胞survivin mRNA的表达,用WST-8细胞计数试剂盒检测肿瘤细胞的增殖.结果 转染了特异性siRNA的肿瘤细胞survivin基因的表达量明显下降,转染后48 h基因表达抑制率为57.47％～88.53％,72 h为69.94％～95.03％;转染后各组肿瘤细胞增殖受到明显抑制,转染后48 h的细胞增殖抑制率为27.88％～47.36％,72 h为42.59％～57.29％;其中序列1的效果最为显著,对3种肿瘤细胞survivin基因表达的抑制率48 h均在75％以上、72 h均在90％以上,对细胞增殖的抑制率48 h均在40％以上、72 h均达50％以上.结论 siRNA能有效沉默survivin基因在多种肿瘤细胞中的表达,抑制肿瘤细胞的增殖,所设计的3条survivin siRNA序列均有活性,以序列1作用最强.

摘要：目的探讨小分子干扰RNA（siRNA）对人肝癌细胞株MHCC-97HSurvivin基因表达及其增殖和凋亡的影响。方法设计、合成针对Survivin基因序列特异性siRNA，用脂质体包裹转染人肝癌细胞株MHCC-97H，实验分为3组：SurvivinsiRNA转染组（Si-survivin组），无关siRNA转染组（NC组）和无转染组（正常对照组）。采用反转录-聚合酶链反应、Westernblot技术检测SurvivinmRNA及蛋白表达；四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖情况；分别以终浓度为12．5、25．0、50．0nmol／L的siRNA作用于细胞后24h，采用流式细胞仪AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡。结果转染后48h，Si—survivin组、NC组、正常对照组SurvivinmRNA表达水平分别为0．55±0．16、0．85±0．28、0．93±0．40，组间比较差异有统计学意义（F=414，P〈0．01）；Si—survivin组最低，与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义（t=-20．56、-28．37，P均〈0．001）。siRNA转染48h后，Si—survivin组、NC组、正常对照组Survivin蛋白相对表达量分别为0．602±0．005、0．835±0．007、0．993±0．003，组间比较差异有统计学意义（F=238，P〈0．01）；Si—survivin组最低，与NC组、正常对照组比较差异均有统计学意义（t=-40．17、-66．03，P均〈0．001）。转染后72h和96h，Si—survivin组细胞抑制率[（19．5±3．6）％、（12．0±0．9）％]显著高于NC组[（3．6±0．9）％、（-1．3±6．1）％]，差异均有统计学意义（t=36．18、42．53，P均〈0．05）。不同浓度siRNA作用于细胞后24h，12．5、25．0、50．0nmol／LsiRNA组、NC组和正常对照组细胞凋亡率[分别为（22．64±2．54）％、（35．37±3．28）％、（53．28±4．35）％、（8．77±1．25）％、（9．72±1．37）％]比较，组间差异有统计学意义（F=35．93，P〈0．01），不同浓度siRNA间细胞凋亡率两两比较，差异有统计学意义（t=-29．73、-38．57，P均〈0．001）。结论Survivin特异性siRNA能抑制人肝癌细胞株MHCC-97HSurvivin基因表达，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。