摘要：中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是目前生产治疗性抗体的主要表达系统,该细胞的培养和抗体表达与培养条件密切相关。本实验室构建出了一种靶向VEGFR2单抗融合MICA的融合蛋白,具有良好的抗肿瘤活性,但是抗体产量较低,限制了该抗体的进一步研发和应用。为了探究适合该抗体的最佳发酵体系,本研究通过Minitab16.0正交法设计多种流加培养方式,探索了4种培养基、流加物以及培养条件对发酵细胞密度和抗体产量的影响,并优化出最佳的发酵方式,即以1×106cells/mL接种密度将细胞接种于商业培养基CDM4PerM Ab,每2 d加入12%(V/V)的流加物Boost2+Boost5。为保持抗体的稳定性和质量一致性,将此发酵方式扩大至3 L发酵罐以提高抗体的批次产量。最终抗体产量可达54.45 mg/L,并且Western blot实验结果验证了融合抗体装配的正确性。MTT实验结果表明JZB01能有效抑制HUVEC、MDA-MB-231和K562的细胞增殖,具有显著的抗血管生成作用以及比母体单抗更有效的抗肿瘤活性。综上,本研究开发出了一种有利于抗体生产的发酵工艺,能够满足实验室抗体研发需求。本实验室将进一步扩大该工艺适用的发酵规模,以满足抗体的临床前研究以及后续工业化生产。

摘要：目的构建含有HIV-1核心蛋白gag基因的真核表达质粒,并研究其免疫应答反应。方法采用PCR方法从1例HIV感染者中扩增出gag基因,构建重组质粒pcDNA-GAG。接种小鼠后,检测其抗体及抗体亚类,并对小鼠的淋巴细胞亚群进行分析,采用3H-TdR法、ELISPOT方法和51Cr释放法分别检测T淋巴细胞的增殖反应性、特异性分泌IFN-γ的CD8+T淋巴细胞以及特异性CTL杀伤活性。结果重组质粒体外表达目的蛋白的相对分子质量(Mr)约为55×103。免疫小鼠后可诱导产生特异性抗体,其中IgG2a与IgG的比例显著高于IgG1与IgG的比例;T淋巴细胞体外经ConA刺激后SI达到160.67,显著高于对照组(14.04,P<0.05);产生IFN-γ的CD8+T淋巴细胞数目以及特异杀伤率均显著高于对照组小鼠(P<0.05)。结论重组质粒pcDNA-GAG可诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答反应,而且ELISPOT方法检测特异性细胞免疫应答反应的结果与51Cr释放法一致,提示可用此法对DNA疫苗诱导的细胞免疫进行评价。

摘要：目的对HPV18型DNA疫苗的免疫原性和安全性进行初步评价。方法将HPV18L1基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,构建DNA疫苗质粒pcDNAL1。使用脂质体将重组质粒转染COS7细胞,用Westernblot检测体外瞬时表达的抗原。将重组质粒pcDNAL1肌肉注射BALBc小鼠(100μg只),加强免疫3次后分别采集血清,用ELISA法和Westernblot法检测抗体,实时荧光定量PCR法检测质粒的组织分布。采用ELISA法检测DNA疫苗免疫后抗核抗体和抗双链DNA抗体的效价。结果重组质粒可在真核细胞中有效地转录和表达HPV18L1蛋白。小鼠免疫后可检出较高滴度的抗HPV18L1抗体和特异条带。免疫后质粒主要分布在注射部位,且随着时间延长被清除;未检测到抗核抗体和抗双链DNA抗体。结论HPV18L1重组质粒可诱导小鼠产生特异的体液免疫反应,且该DNA疫苗是安全的,为进一步研制开发HPVDNA疫苗打下了基础。

摘要：目的调查合肥地区糖尿病及糖调节异常人群患病率,分析与性别、年龄组的分布特点。方法设计同意表格,采取随机整群抽样,调查某社区内的40岁以上常住人口,统计糖尿病及糖调节异常患病率,分析与年龄、性别的关系。结果糖尿病患病率为15.11%,糖耐量异常患病率为16.68%,糖调节异患病率为36.97%。糖尿病及糖调节异常人群的性别差异及年龄组差异有统计学意义(P<O.05)。结论合肥地区糖尿病及糖调节异常发生率较高。中、老年人群是社区干预的重点对象。

摘要：目的调查某地区糖代谢异常人群患病率,并分析糖代谢异常的相关因素。方法设计同意表格,调查某社区内的40岁以上常住人口,统计糖代谢异常患病率,并分析糖代谢与年龄、性别、吸烟、饮酒、喝茶、收缩压、舒张压、血肌酐、尿素氮、甘油三酯、胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、γ谷氨酰转肽酶等,糖化血红蛋白等的关系。结果糖尿病患病率为15.11%,糖耐量异常(IGT)患病率为16.68%,空腹血糖受损(IFG)患病率为5.19%,糖代谢异常患病率为36.97%。糖代谢异常糖调节异常的危险因素为年龄组、收缩压、糖化血红蛋白、甘油三酯、谷丙转氨酶、γ谷氨酰转肽酶,有统计学意义(P<0.05)。结论合肥地区糖代谢异常发生率较高。增龄、收缩压、糖化血红蛋白、甘油三酯、谷丙转氨酶、γ谷氨酰转肽酶等是糖尿病的主要危险因素,提示:高血糖、高血压、高血脂、肝酶异常以及中、老年人群是社区干预的重点对象。