摘要：目的运用CRISPR/Cas9技术构建EIF5A2基因敲除Cal27细胞系,观察EIF5A2在口腔鳞状细胞癌增殖与迁移中的作用。方法根据EIF5A2基因结构域,设计2个CRISPR靶向位点,利用pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin构建2个导向RNA(sgRNA)质粒。将sgRNA质粒与pST1374-NLS-flag-linker-Cas9共转染至Cal27细胞中,用嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选,并挑取单克隆。将单克隆细胞的DNA进行目的片段扩增,经凝胶电泳及测序鉴定后筛选出大片段敲除细胞株Cal27-2C5及碱基突变株Cal27-2D1。real time PCR及WesternBlot鉴定两株细胞系中EIF5A2的表达情况。用Transwell实验及CCK8分别检测EIF5A2敲除对Cal27细胞的体外迁移能力及体外增殖能力的影响。结果与对照组相比,Cal27-2C5及Cal27-2D1细胞株中EIF5A2在mRNA水平上表达均明显降低。在蛋白水平上,Cal27-2C5及Cal27-2D1细胞株中EIF5A2蛋白均基本不表达。敲除EIF5A2可明显降低Cal27细胞的体外迁移能力,而对Cal27细胞体外增殖能力没有明显影响。结论成功构建EIF5A2基因敲除Cal27细胞株Cal27-2C5和Cal27-2D1,并初步验证EIF5A2可以影响Cal27细胞的体外迁移能力。

摘要：随着计算机技术的不断发展，计算机网络的普遍应用，各单位的信息化建设也日益普及，各单位对计算机系统的维护与管理的担子也日益加重。所用的网络设备越来越多，有众多的品牌、型号和配件。对于设备维护人员来说，必须建立详细的设备维护档案才能搞好网络设备维护工作。为了提高设备档案管理的效率，我们设计了网络设备维护档案管理系统。

摘要：TBM始发井渗漏水,造成井内湿度过高,锈蚀金属部件,影响TBM设备组装质量,同时,长期大量渗漏水可能造成周围地面沉降,影响始发井与周围建筑物安全。基于此,论文以青岛地铁2号线某TBM始发井渗漏水注浆治理工程为依托,开展近海裂隙岩体渗漏水注浆治理研究,为保护竖井锚索不被地表钻孔破坏,影响始发井安全,采用径向注浆工艺;基岩裂隙较小,且海水具有一定腐蚀性,为保证注浆止水效果,注浆材料选用硫铝酸盐水泥;试验区域通过上述注浆治理,仅有少量湿渍,无明水,已经达到治理效果。

摘要：以双乙烯酮为起始原料,设计并合成了一系列新颖的1,2,3-噻二唑-4-乙酰苯胺(吗啉)类化合物,通过元素分析、红外光谱、核磁共振氢谱和质谱对其结构进行了表征.生物活性测试结果表明,部分化合物具有一定的抗TMV活性、植物生长调节活性和杀菌活性.

摘要：为采取有效的措施对杂散电流进行预测和预防,需要对管线上的杂散电流进行检测。针对杂散电流的无规律,快变化的特性,采用一种SCM-200a杂散电流测量仪对其进行检测。由于杂散电流的干扰,管地电位不断发生变化,因此可以将管地电位看作一随机变量,这个变量符合一定的分布规律,可以应用数理统计的方法分析这个随机变量。

摘要：中国传统哲学思想中,“和”是一个很重要的概念,“和谐”亦作为中国文化的核心精神,在中华民族各个历史发展阶段中起着十分重要的作用。太极拳经历千年中国传统文化积淀,结合中国朴素哲学思想、古代军事、祖国医学、古典文学艺术、民族民俗风情等于一身兼容续之,刚柔并济、虚实轻盈、开合有度、形意相随的特点,舒展出怡情养性、陶冶心神、外弛内刚、强健身心又不失技击特性的演练。既矛盾又和谐的对立统一美,成为人们健身、养身、修身所喜爱的一项锻炼内容,古往今来魅力价值亦渐突显,当今更是风靡全球。

摘要：从内蒙古自治区暴发猪"高热病"的猪场分离出1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenicporcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV),命名为NMl株。根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全基因序列设计引物进行RT-PCR扩增和序列测定,结果表明HP-PRRSV NMl株基因组全长15 356 bp(包括PolyA尾)。分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株(VR-2332)和欧洲型标准株(LV)全基因核苷酸同源性分别为89.4%和61.9%,说明NMl属于美洲型毒株。与VR-2332相比,NMl株非结果蛋白(nsp2)第481位和第533～561位氨基酸存在缺失,该毒株属于PRRSV变异株。动物接种试验结果表明,该毒株对猪具有高致病性。

摘要：根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJ株F3代全基因序列(GenBank登录号为EU860248),结合多个PRRSV亚洲株Nsp2基因比对结果,设计合成引物,选择高致病性PRRSV TJ株噬斑克隆纯化前后14个不同代次,利用合成的引物扩增各代次Nsp2基因的高变区片段及F3代和F92代Nsp2全基因,并进行产物克隆和氨基酸序列分析及结构预测。测序结果表明:PRRSV TJ株在克隆传代过程中出现了序列整段缺失,共缺失120个氨基酸,并且从F18代噬斑克隆开始一直稳定存在。缺失高变区及Nsp2蛋白二级结构预测结果表明:缺失的氨基酸使Nsp2蛋白在空间结构上发生了较大的变化,推测这可能与PRRSV TJM–F92的毒力和致病力减弱有关。

摘要：高强纤维材料在混凝土结构加固工程中已被广泛应用,其中利用约束混凝土原理,在柱环向缠绕纤维材料构成增强纤维塑料外壳后,能有效地改善原混凝土柱的承载性能,提高强度,增大延性.通过对钢筋混凝土圆形、矩形、椭圆形等截面短柱经不同高强纤维包裹后的22个轴心受压试件的试验研究,证实了柱截面形状对约束效果有很明显影响,文章讨论了纤维约束混凝土的工作机理、破坏过程、破坏性质、压溃荷载的计算方法,并对承载力等设计指标的取值提出了看法.

摘要：参照GenBank中PRRSV VR-2332株全序列设计特异性引物,扩增高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Por-cine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)TJ株和其致弱毒株TJM株非结构蛋白2(Nonstructure pro-tein 2,Nsp2)编码区,经过基因的扩增、连接、转化、筛选阳性克隆进行核苷酸测序.结果表明,PRRSV TJ株Nsp2长2 850 bp,TJM株Nsp2长2 490 bp.通过序列比较分析,发现Nsp2编码区序列保守性差,TJ株和TJM株Nsp2与VR-2332核苷酸序列的同源性分别为83.6%和82.9%,运用RNAdraw软件对Nsp2编码区RNA的2级结构预测分析表明,分离的高致病性强毒株TJ株和细胞致弱毒株TJM株与经典毒株VR-2332有较大不同,PRRSVNsp2的1级序列的变化导致RNA的2级结构发生构象变化,推测这可能是3个PRRSV毒株致病力不同的原因之一.