摘要：选择蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)磷酸丙糖异构酶(TPI)基因作为靶基因设计引物,以包含TPI基因序列的人工合成质粒为模板,建立基于介导等温扩增(LAMP)微流控芯片的贾第虫检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性和稳定性进行评价。结果显示,建立的贾第虫LAMP微流控芯片检测方法可在30 min内完成核酸的扩增,检测敏感性可达4.0×10拷贝/μl和0.01 ng核酸/μl。隐孢子虫、旋毛虫、艾美耳球虫、戊肝病毒和粪肠球菌核酸均不能扩增,对贾第虫具有良好的特异性。以不同稀释浓度重组质粒为模板进行稳定性和重复性实验,结果显示核酸浓度与反应时间具有良好的相关性,对阳性粪样的检测结果显示扩增信号。建立了基于LAMP微流控芯片的贾第虫核酸检测方法,该方法操作简单、特异性强。

摘要：目的建立混凝沉淀富集回收水中隐孢子虫卵囊的方法。方法以4μm荧光微球为研究对象,采用混凝沉淀试验,通过正交设计筛选出最佳混凝剂[聚合氯化铝(PAC)、水溶性壳聚糖(WSC)、1 mol/L的NaOH溶液用量]的配方,并观察不同pH值(6～9)、浑浊度(0～15 NTU)和水温(5～15℃)对回收率的影响。结果确定了最佳混凝配方,聚合氯化铝浓度为80 mg/L,壳聚糖浓度为30 mg/L,1 mol/L氢氧化钠溶液用量为0.6 ml。当pH值在6～9范围内,回收率均在86%以上;当水温在5～25℃范围内,回收率在55%以上;当浑浊度为0～15 NTU范围内,回收率均在90%以上。且回收率均随着pH值、水温和浑浊度的升高而上升。向实际水样投加隐孢子虫,采用混凝沉淀法与EPA1623法进行富集比较,差异无统计学意义。结论该方法能够高效富集回收水中的隐孢子虫卵囊,并对实验条件要求较低,适用于一般实验室对水中隐孢子虫卵囊的检测。

摘要：目的研究一种饮水澄清消毒剂杀灭水中大肠杆菌的效果及其影响因素,为实际应用提供科学依据。方法采用模拟现场水消毒试验方法,对该饮水澄清消毒剂杀灭大肠杆菌效果进行了评价。结果该饮水澄清消毒剂以二氯异氰尿酸钠为杀菌成分,聚合氯化铝为澄清剂组合而成。有效氯浓度为10 mg/L的该消毒剂能使水样中人工污染的大肠杆菌下降至0 cfu/100 ml。设计条件下的初始浊度、pH值、水温及色度对其杀菌效果无明显影响。结论该饮水澄清消毒剂对水体中大肠杆菌杀灭效果较好,具有良好的澄清作用,适应自然条件范围广。

摘要：目的探讨提高PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法的特异性和敏感性,为防止隐孢子虫病流行提供检测依据。方法应用BALB/c小鼠感染扩增卵囊,不连续蔗糖密度梯度离心法从粪便中纯化卵囊,通过冻融和超声法破碎卵囊,然后以酚/氯仿/异戊醇法提取基因组DNA作为PCR扩增模板,根据隐孢子虫保守基因18S rRNA,设计一对特异性的引物,扩增约450bp的目的片段。结果超声处理法对隐孢子虫卵囊的破囊率为92%,明显高于冻融法的86%。2个组抽提的DNA作为模板均扩增出目的片段,但超声处理组敏感性高于冻融处理组,分别能检测到卵囊2个/mL和20个/mL。结论超声法对微小隐孢子虫卵囊的破碎效果优于冻融法,经改进的PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法具有特异性好和敏感性强的特点。

摘要：目的建立基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术的GⅡ型诺如病毒快速检测方法。方法设计针对GⅡ型诺如病毒特异性保守序列的RPA引物,利用RPA检测试剂盒建立RPA扩增体系,并通过2%琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分析鉴定,从而对引物扩增效率、特异性、灵敏度和稳定性进行评价。结果本研究针对GⅡ型诺如病毒特异性保守序列设计了RPA特异性引物RPAf/RPAr,利用RPA检测试剂盒建立了RPA扩增体系。引物筛选实验结果显示,RPA检测方法在扩增反应5min后即可定性检测诺如病毒。将GⅡ.4型诺如病毒、GⅡ.17型诺如病毒、GⅡ.3型诺如病毒、GⅡ.6型诺如病毒、星状病毒、MS2噬菌体、人轮状病毒和人腺病毒基因组作为模板进行特异性检测。结果显示,只有GⅡ.4、GⅡ.17、GⅡ.3和GⅡ.6型诺如病毒有特异性扩增,表明该方法特异性良好,可基本满足对GⅡ型诺如病毒的检测。灵敏度实验结果显示,该方法可检测低至106 copies/μL的诺如病毒。利用10例诺如病毒阳性粪便样品对RPA检测方法稳定性进行评价。结果表明,10例样品均被特异性扩增,表明该方法稳定较好。结论本文建立的RPA检测方法特异性强、灵敏度高、稳定性好以及可操作性强,可用于对诺如病毒的检测。