摘要：目的　建立逆转录聚合酶链反应系统 ,用于检测恶性疟原虫感染。方法　以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段 ,设计一对特异引物 ,分别采用RT -PCR技术和PCR技术进行检测恶性疟原虫血样并比较两者检测的敏感性。结果　从培养的恶性疟血样中扩增出 35 9bp特定扩增带 ,而间日疟和健康人血样均未见扩增带。经限制性内切酶分析证实扩增产物为目的片段。检测系统初步显示可检出恶性疟血样中 0 34个疟原虫所含的RNA模板。以RNA为检测对象的RT -PCR肉眼可见条带的检测水平较以DNA为检测对象的PCR扩增高。结论　RT -PCR检测恶性疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点 。

摘要：在同一反应体系中建立能同时检测和鉴定恶性疟、间日疟及混合感染的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法,并用于现场采集血样检测。先以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段,设计1对针对恶性疟原虫的特异性引物,建立RT-PCR检测恶性疟原虫方法,在此基础上,增加1条针对间日疟原虫的种特异性引物,使在同一反应体系中,能够同时扩增恶性疟原虫和间日疟原虫的特异片段。恶性疟原虫和间日疟原虫模板在同一反应体系中分别被扩增出预期大小为359bp和449bp特定扩增带,健康人血样和空白对照均未见扩增带。用建立的RT-PCR检测方法对现场采集128份血样进行检测,与镜检的阳性符合率为9609%,14份镜检为阴性的发热病人全血标本中2份RT-PCR检测为间日疟阳性。RT-PCR检测疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点,对疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值。

摘要：目的 建立逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测恶性疟原虫的新方法，并用于检测现场采集血样。方法以恶性疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因为靶片段，设计一对特异引物，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，恶性疟原虫预期被扩增出３５９ｂｐ特定扩增带。结果 从培养的恶性疟血样和现场采集的恶性疟血样中扩增出３５９ｂｐ特定扩增带，而间日疟和健康人血样均禾见扩增带。经限制性内切酶分析证实扩增产物为目的片段。本检测系统初步显示可检出０．３４个疟原虫／μι血样，３７份现场采集经镜检确诊的恶性疟血样中，３６份ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性，１份ＲＴ－ＰＣＲ检测为阴性，阳性符合率为９７．３５％。结论　ＲＴ－ＰＣＲ检测恶性疟原虫方法具有敏感性高、特异性强的特点，对疟疾诊断、镜检质量控制和流行病学研究具有较大的实用价值。

摘要：目的　建立一种恶性疟原虫氯喹抗药性基因pfcrt点突变的检测方法,以判断是否存在氯喹抗药性。方法　根据恶性疟原虫pfcrt基因序列设计巢式PCR引物,以恶性疟原虫DNA为模板扩增出一条包含第76位密码子的DNA片段;扩增产物经限制性内切酶Apo I消化,用琼脂糖凝胶电泳观察恶性疟原虫pfcrt等位基因是否为突变型。结果　31份样本经巢式PCR扩增均出现14 0 bp左右的特异性片段。酶切消化后,9份滤纸血样本中有4例出现1条14 0 bp左右的片段,为突变型pfcrt等位基因,其余5份出现97bp与4 8bp两种酶切片段,为野生型pfcrt等位基因;2 2份血涂片样本中有10份突变型,突变率为4 5 .16 %。14例突变样本中,有1例体内实验氯喹治疗有效。结论　巢式PCR- RFL P法可以快速、高效的检测恶性疟原虫pfcrt基因76位密码子的点突变,并且能够初步应用于恶性疟原虫氯喹抗药性的鉴别。

摘要：[目的 ]建立间日疟原虫环子孢子蛋白 (CSP)基因分型法用于地理株的鉴定。[方法 ]Chelex 10 0离子交换法提取滤纸血样中的微量DNA ;套式PCR和等位特异PCR技术、琼脂糖电泳分析法、斑点印迹和Southern印迹 探针杂交技术分别用于判别性片段的扩增、分析和鉴定。[结果 ]用本文描述的套式 等位 特异PCR分型法 ,从一小片滤纸血样提取的微量DNA中 ,扩增出不同长度范围的 3种判别性片段 :6 5 0～ 770bp(间日疟种特异 ) ,15 0～2 30bp(温带族特异 ) ,5 88～ 6 15bp(PV 2型特异 )。用本法检测参考虫株出现的带型和长度与设计的靶序列完全吻合。检测 5 9份国内感染血样 ,42份鉴定为温带族虫株 ,15份为热带族虫株 ,2份为PV 2型虫株。 4份境外感染血样中 ,2个巴基斯坦分离株均为温带族 ,缅甸和老挝各 1株均为热带族虫株。 [结论 ]①本法能同时区分PV 1型 ,PV 2型以及温带族与热带族虫株 ,且较现有 (PCR 探针杂交 )法更为简便、快捷 ;②现场血样初步检测结果显示 :我国存在PV 1型 (温带族与热带族 )虫株和PV 2型虫株 ,也可能存在温带族东南亚组虫株。