摘要：根据猪瘟病毒Brescia株全基因序列设计合成特异性引物对P1/P2对 ,采用异硫氰酸胍一步法 (略加修改 ) ,从PK15细胞培养物中提取石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒 0 3株及野毒 0 7株猪瘟病毒的总RNA。应用RT PCR方法成功地扩增出E2全基因组约 12 73bp的cDNA片断 ,经电泳证明其大小与推测相符。分别将石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒 0 3株及野毒 0 7株的E2基因片段克隆到 pGEM -T载体质粒 ,通过对这 4个重组质粒的EcoRI酶切鉴定、直接与套式PCR扩增 ,并对E2主要抗原区域进行了 2 2 4bp的序列测定 ,表明E2全基因克隆成功 。

摘要：为快速、准确测定高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)活疫苗(JXA1-R株)的病毒含量,根据GenBank中该病毒的保守基因序列设计合成了引物和探针,优化反应条件,建立了其活疫苗病毒含量的荧光定量PCR方法。用该方法测定疫苗样品的病毒含量,每头份稀释100倍后,Ct均值为17.08,病毒拷贝数均值为4.61×107copy/μL。将建立的荧光定量PCR与传统的TCID50方法进行相关性分析,相关系数r=0.83,表明该方法可用于HP-PRRS活疫苗半成品及成品的病毒含量测定。