摘要：文章试从影视广告的特性和诉求、动画广告的表现方式以及定格动画的文化价值等方面出发,结合英国阿德曼动画公司制作的定格动画广告片,浅谈定格动画的广告性创新。

摘要：目的探讨基质金属蛋白酶-1(MMP-1)短发夹RNA(shRNA)的慢病毒表达载体在人舌鳞癌细胞株CAL27中对MMP-1表达及细胞侵袭、转移的作用。方法设计合成用于干扰人MMP-1的shRNA并与载体PLKO.1连接,构建重组的慢病毒载体质粒PLKO.1/MMP-1-shRNA,稳定感染CAL27细胞。Western blot检测CAL27细胞中MMP-1蛋白表达,划痕实验和Transwell实验分别检测CAL27细胞的迁移和侵袭能力。结果成功构建慢病毒载体PLKO.1/MMP-1-shRNA;其能明显下调CAL27细胞中MMP-1蛋白表达,抑制CAL27细胞迁移和侵袭能力。结论慢病毒载体PLKO.1/MMP-1-shRNA能有效抑制MMP-1表达、细胞迁移和侵袭。MMP-1可能是舌鳞癌细胞转移的重要调节因子。

摘要：目的:构建靶向黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)质粒表达载体,转染人舌癌细胞Tca8113后观察其对FAK表达的抑制作用。方法:根据siRNA的设计原则,在人FAK mRNA序列中,设计并合成2条特异性靶序列寡核苷酸及2条无关对照序列,经退火成互补双链,再克隆到pGC-SilencerTM-U6/Neo真核表达载体中,构建重组体pSilencer-FAK并进行酶切鉴定;转染重组质粒至Tca8113细胞中,经G418抗性筛选,获得稳定转染细胞系;运用免疫细胞化学和Western-blot鉴定FAK的沉默效应。结果:质粒酶切证实目的寡核苷酸片段已被克隆到pGC-SilencerTM-U6/Neo载体中;pSi-lencer-FAK转染细胞后,FAK基因的表达受到明显抑制。结论:成功构建了针对人FAK的siRNA表达载体,通过转染Tca8113细胞可有效地抑制细胞中FAK的表达。

摘要：目的:构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferators activated receptor γ coactivator 1α,PGC-1α)短发夹RNA(short hairp in RNA,shRNA)慢病毒表达载体,体外评价其对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)分化的影响。方法:根据shRNA设计原则,设计合成用于体内干扰PGC-1α编码序列的shRNA,重组入慢病毒载体PLKO.1。将构建正确的PLKO.1/PGC-1α-shRNA感染DSPC,实时荧光定量PCR检测PGC-1α的表达,细胞化学染色和实时荧光定量PCR检测其对DPSC分化的影响。结果:测序证实重组质粒构建成功;体外试验表明,DPSC转染了PGC-1α-shRNA后PGC-1α表达水平降低,干扰效率达81%,而且细胞钙化结节增多,牙本质涎磷蛋白和Ⅰ型胶原的表达明显上调,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。结论:慢病毒介导的PGC-1α-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并影响牙髓干细胞的分化。

摘要：目的构建雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,探讨其对根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs)体外成牙/成骨向分化的影响。方法根据shRNA设计原则,合成用于体内干扰ERα的两条shRNA序列,重组入慢病毒载体PLKO.1。将PLKO.1对照组与ERα-shRNA(sh ERα-1和sh ERα-2)实验组分别感染SCAPs,western blot检测ERα的表达及其对SCAPs成牙/成骨向分化的影响。结果测序结果证实重组质粒构建成功;体外实验表明,SCAPs转染ERα-shRNA后ERα蛋白表达水平降低,其中sh ERα-2组对ERα的下调作用更明显,两组ERα-shRNA中核心结合蛋白因子2(runt-related transcription factor-2,RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)和骨钙素(osteocalcin,OCN)的表达均有不同程度下调,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。结论慢病毒介导的ERα-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并显著影响了根尖牙乳头干细胞的成牙/成骨向分化。

摘要：目的:构建神经纤毛素1(Neuropilin-1,NRP-1)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,体外评价其对人舌鳞状细胞癌细胞株SCC25(squamous cell carcinoma 25)分化的影响。方法:根据shRNA设计原则,设计合成用于体内干扰NRP-1编码序列的shRNA,重组入慢病毒载体PLKO.1。将构建正确的PL-KO.1/NRP-1-shRNA感染SCC25,western blot和实时荧光定量PCR检测NRP-1的表达,划痕实验和实时荧光定量PCR检测其对SCC25分化的影响。结果:测序证实重组质粒构建成功;体外试验表明,SCC25转染了NRP-1-shRNA后NRP-1表达水平降低,干扰效率达65%。划痕实验结果表明NRP-1下调明显降低了SCC25的迁移能力。实时荧光定量PCR结果表明NRP-1下调可以导致SCC25上皮标记蛋白钙粘附蛋白(epi-thelial cadherin,E-cadherin)表达上调,而间充质标记蛋白纤粘蛋白(fibronectin,FN)和波形蛋白(Vimentin,VIM)表达下调,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。结论:慢病毒介导的NRP-1-shRNA成功在体外抑制了目的基因的表达,并影响SCC25的分化。