摘要：目的探讨以腺病毒载体局部应用血管内皮生长因子(Ad-VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(Ad-bFGF)基因治疗对大鼠缺血皮瓣生存的影响。方法50只SD大鼠随机分成5组,每组10只。在其背部形成8cm×2cm的缺血皮瓣。于皮瓣远端皮下分别注射Ad-VEGF和Ad-bFGF(目的基因组),Ad-VEGF(基因对照组),Ad-bFGF(基因对照组)Ad-GFP(绿色荧光蛋白基因对照组),PBS(磷酸盐缓冲液空白对照组)。48h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7d,测量皮瓣的成活面积及免疫组化,组织学检查等。结果目的基因组皮瓣成活面积比及单位面积微血管密度与其它4个对照组有显著性差异。免疫组化目的基因组毛细血管周围VEGF、bFGF沉积。结论以腺病毒为载体局部应用VEGF和bFGF基因能增加缺血皮瓣的成活面积。

摘要：目的探讨耳后皮瓣在外耳部分缺损亚单位分区修复的方法选择和效果。方法25例耳缺损按部位分5区，对于1、2区缺损，利用以耳上极为蒂的耳后乳突区皮瓣携同侧或对侧耳甲软骨一期转移修复；3区缺损则利用蒂在后的耳后皮瓣结合耳甲软骨或肋软骨条移植，二期修复；4区则软骨开窗将耳后皮瓣穿引至前方覆盖修复；5区均利用耳后延及乳突区或颈部双叶瓣或菱伯格皮瓣折叠修复；3例耳再造术后的软骨外露以颞浅筋膜瓣包盖加植皮修复。结果除9例需二期修整或断蒂外，余均一期完成。3例颞浅筋膜植皮者瘢痕色差较明显，1例隧道移植耳甲腔患者表皮部分糜烂，换药后愈合。结论对外耳各亚单位缺损，若耳周皮肤完好，耳后乳突区皮瓣是首选的修复方法，色泽质地匹配，可根据血供和分区设计不同形式、联合耳甲软骨或肋软骨一期或二期完成。颞浅筋膜瓣用于修复耳再造软骨外露等。

摘要：目的:探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣,对皮瓣早期断蒂的影响。方法:实验于2004-08/2005-09在安徽医科大学第一附属医院外科动物实验中心及中心实验室完成。健康SD雄性大鼠30只,随机分成3组:目的组、绿色荧光蛋白对照组、空白对照组,每组10只。所有实验大鼠背部设计2cm×6cm随意皮瓣,蒂位于髂脊水平。皮瓣形成后,术时即刻将磷酸盐缓冲液稀释的重组复制缺陷型腺病毒携带血管内皮细胞生长因子165基因溶液(目的组)、磷酸盐缓冲液稀释的重组复制缺陷型腺病毒携带绿色荧光蛋白溶液(荧光蛋白对照组)、磷酸盐缓冲液溶液(空白对照组)1mL注射到大鼠皮瓣内,给药后即刻以3-0丝线原位缝合,继续单笼饲养。所有实验大鼠皮瓣4d后断蒂,断蒂后7d观测皮瓣存活面积,取皮瓣远端存活区组织苏木精-伊红染色,光镜下观察组织学变化,免疫组织化学染色检测血管内皮细胞生长因子165表达情况,用CD34免疫组织化学染色计算血管密度。结果:①断蒂后7d,所有实验动物全部存活,皮瓣存活区与坏死区已经明确。②皮瓣存活率、皮瓣血管断面密度目的组和对照组之间差异有显著性犤皮瓣存活率:目的组为(98.8±1.5)%,荧光蛋白对照组为(78.3±2.5)%,空白对照组为(79.2%±2.4)%;皮瓣血管断面密度:目的组为(49.6±6.3)个/高倍视野,荧光蛋白对照组为(37.5±3.0)个/高倍视野,空白对照组为(39.5±3.0)个/高倍视野,P0.05)。③免疫组织化学染色各组均可见棕黄色颗粒沉积,目的组比对照组染色深。④组织学观察,目的组皮瓣真皮、肉芽及肌肉中可见大量毛细血管,而对照组较少。结论:应用重组复制缺陷型腺病毒携带血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣具有促进皮瓣早期断蒂的作用。

摘要：目的　从Hep 2细胞(人喉鳞癌细胞)克隆人的FGF 2cDNA,用于下一步构建携带hFGF 2cDNA的非复制型腺病毒载体。方法　设计和合成引物,提取Hep 2细胞的总mR NA,通过RT PCR扩增出目的cDNA,然后将其重组到pGEM TEasy载体中送测序分析。结果　经基因测序分析表明,从Hep 2细胞克隆的hFGF 2基因序列与已报告的序列,除在ATG后的第24位碱基发生无意突变外(由G→A),其他序列则完全一致。结论　从Hep 2细胞的总mRNA中成功克隆出hFGF 2的基因片段。

摘要：背景:发展一种安全有效的方法来促进骨缺损是修复重建外科面临的重要问题,自体骨移植仍是目前优先考虑的选择,但供区有限且不可避免地对供区造成新的损害;同种异体骨移植存在免疫排斥反应;非骨性材料移植物在临床实践中的并发症仍居高不下。目的:探讨壳聚糖介导真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4转染兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的可行性。设计、时间及地点:细胞基因工程学体外实验,于2007-09/2008-04在安徽医科大学与中国医科大学完成。材料:清洁级新西兰大白兔8只,由安徽医科大学实验动物中心提供。壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4为课题组自行构建。方法:无菌条件下抽取兔骨髓,Percoll法体外分离培养骨髓间充质干细胞,通过换液和贴壁吹打法进行纯化扩增。第3代骨髓间充质干细胞80%融合后,按1×108L-1密度接种,实验组采用壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4进行转染,对照组不转染质粒,继续以含10%FBS的L-DMEM普通培养基进行培养21d。主要观察指标:碱性磷酸酶及茜素红染色检测细胞分化情况,扫描电镜观察细胞结构变化。结果:转染14d后实验组碱性磷酸酶染色呈强阳性表达,茜素红染色出现大量棕红色的钙结节,电镜观察细胞内含有大量碱性磷酸酶的小泡,细胞周围大量基质分泌;对照组碱性磷酸酶与茜素红染色均呈阴性,电镜下细胞内几乎没有含碱性磷酸酶的小泡。结论:兔骨髓间充质干细胞在体外经壳聚糖介导的真核双表达质粒pIRES-hVEGFl2lcDNA/hBMP-4转染后,可定向分化为成骨细胞。

摘要：目的:探讨小阴唇皮瓣法在先天性阴道闭锁的临床应用。方法:选择适宜的13例先天性阴道闭锁患者,根据阴道缺损的量设计应用部分或完全小阴唇皮瓣进行部分或全阴道再造。结果:所有手术获得成功,再造阴道均通畅,湿润,光滑有弹性,有功能性子宫的病人月经正常,性生活满意,并有3例获正常妊娠分娩。结论:选择小阴唇发育良好的病例应用小阴唇皮瓣法再造阴道,其方法简便,损伤小,无外显瘢痕,费用少,值得在临床选择推广应用。

摘要：目的探讨腺病毒为载体的血管内皮细胞生长因子(Ad-VEGF121)基因治疗对大鼠缺血皮瓣成活的影响。方法30只SD大鼠,随机分成3组,在其背部形成8cm×2cm随意型皮瓣。于皮瓣远端皮下分别注射Ad-VEGF121(10只目的基因组),Ad-GFP(10只绿色荧光蛋白对照基因组),PBS(10只磷酸盐缓冲液空白对照组)。48h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7d,测量皮瓣的成活面积,并采集组织行免疫组化、组织学检查等。结果3组中Ad-VEGF121组皮瓣成活面积比及单位面积微血管密度与其他2个对照组有显著性差异。免疫组化目的基因组毛细血管周围VEGF121沉积。结论腺病毒为载体Ad-VEGF121基因能增加缺血皮瓣的成活面积。

摘要：目的 探讨局部应用以腺病毒为载体的血管内皮生长因子（Ad-VEGF165）基因治疗对大鼠缺血皮瓣生存的影响.方法 选用SD大鼠30只,体重350～400 g,随机分成3组,每组10只,在其背部形成8 cm×2 cm的全厚随意型皮瓣.于皮瓣远端皮下分别注射携带血管内皮生长因子基因的腺病毒（Ad-VEGF165目的基因组,简称VEGF165组）,携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒（Ad-GFP基因组对照,简称GFP组）,磷酸盐缓冲液（PBS空白对照组,简称PBS组）,48 h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7天,测量皮瓣的成活面积,计算成活面积百分比,并采集成活皮瓣组织行免疫组化、组织学检查等.结果 皮瓣成活面积百分比：VEGF165组为（69.4±1.3）%,GFP组为（52.2±1.7）%,PBS组为（52.9±2.9）%,VEGF165组皮瓣成活面积百分比明显高于GFP组和PBS组（P＜0.01）.免疫组化显示VEGF165组毛细血管周围VEGF沉积,组织切片微血管密度明显高于GFP组和PBS组（P＜0.01）.结论 局部皮下注射Ad-VEGF165可诱导局部VEGF蛋白表达,促进新生血管的形成,提高缺血皮瓣的成活面积,是一种简单有效的基因治疗方法.

摘要：目的探讨腺病毒介导的碱性成纤维细胞生长因子基因(Ad-bFGF)对大鼠随意皮瓣早期断蒂的影响。方法SD♂大鼠,普通级,随机分成3组:Ad-bFGF目的组、Ad-GFP对照组、PBS对照组,每组10只。于大鼠背部设计2cm×6cm随意皮瓣,蒂位于髂脊水平。术后4d断蒂,断蒂后7d观测皮瓣成活面积,检测bFGF表达情况,计算血管密度。结果目的组皮瓣的成活率、血管密度和染色深度均较两对照组有显著差异(P<0.05)。结论应用Ad-bFGF基因治疗能够促进大鼠随意皮瓣早期断蒂。

摘要：目的探讨局部应用以复制缺陷型腺病毒为载体的血管内皮生长因子(Ad-VEGF165cDNA)基因治疗对大鼠随意缺血皮瓣生存的影响.方法选用30只SD大鼠,体重350～400 g,随机分成三组,在其背部形成8 cm×2 cm的全厚随意型皮瓣.于皮瓣远端真皮下分别注射Ad-VEGF165cDNA(10只目的基因组)、Ad-GFP(10只绿色荧光蛋白基因对照组)、PBS(10只磷酸盐缓冲液空白对照组).48 h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合,术后7d,测量皮瓣的成活面积,并采集组织行免疫组化、组织学检查等.结果皮瓣成活率: Ad-VEGF165cDNA组为(74.382±1.338)%,Ad-GFP组为(52.246±1.663)%, PBS组为(52.871±2.890)%,Ad-VEGF165cDNA组与其他两组间差异有显著性(P<0.01),免疫组化显示基因转染组毛细血管周围VEGF沉积,其微血管密度明显高于对照组.结论局部皮下注射Ad-VEGF165cDNA,可诱导局部VEGF蛋白表达,促进新生血管的形成,提高缺血皮瓣的成活面积,是一种简单有效的基因治疗方法.