摘要：目的 探讨人乳头状瘤病毒（HPV）16型多肽疫苗联合紫杉醇＋顺铂（TP）化疗方案治疗宫颈癌的可行性,并观察其体内外效应.方法 （1）针对抗原加工相关转运子（TAP）设计HPV16E7蛋白的主要组织相容性复合物Ⅰ（MHC-Ⅰ）抗原结合表位,利用生物信息学分析平台结合体内外实验研究,筛选出一敛性较高、特异性及亲和力较强的HPV16 E7多肽,命名为E7Pa.（2）C57BL/6小鼠注射鼠肺上皮细胞株TC-1细胞（为鼠源性的HPV16阳性的肿瘤细胞株）后,采用等额抽取的随机方法将样本分为6组,E7Pa＋CpG＋TP、E7Pa＋CpG、CpG＋TP、TP和CpG组均为实验组及空白对照组（予生理盐水注射组）.通过定期测量,绘制肿瘤生长曲线,比较各组小鼠肿瘤体积的变化;酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠外周血中γ干扰素（INF-γ）、白细胞介素2（IL-2）的表达水平;TUNEL试剂盒检测肿瘤组织的细胞凋亡情况;记录各组动物自接种肿瘤细胞开始至死亡的时间,绘制生存曲线;作小鼠相关脏器病理检查及白细胞计数观察治疗的安全性.结果 肿瘤生长第60天时,E7Pa＋CpG＋TP组肿瘤体积为（0.013±0.010）cm3与空白对照组（1.900±0.075）cm3相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;E7Pa＋CpG组体积为（0.340±0.038）cm3、TP＋CpG组体积为（0.650±0.029）cm3、TP组体积为（1. 100±0.052）cm3,CpG组体积为（0.890±0.047）cm3,分别与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;小鼠的平均生存时间E7Pa＋CpG＋TP组（108.50±8.97）d,E7Pa＋CpG组（100.02±2.27）d,CpG＋TP组（79.63±4.05）d,TP组（73.24±3.11）d,CpG组（68.63±1.38）d,对照组（52.37±2.47）d,E7Pa＋CpG＋TP组及E7Pa＋CpG组平均生存期与对照组比较生存期明显延长,差异有统计学意义（P＜0.01）;同时,免疫治疗组可有效的激发自身免疫系统活化对抗肿瘤细胞的恶性增生,而化疗组可以显著杀伤恶性细胞,诱导凋亡.免疫治疗与化疗的联用明显优于两者单用,可以在充分调动自身免疫杀伤效应的同时增加化疗药物的抗肿瘤效应.在药物副作用的研究中,联合用药与其他实验组差异无统计学意义.结论 在动物模型中,人乳头状瘤病毒16型多肽疫苗联合紫杉醇＋顺铂化疗可以有效治疗HPV16 E7阳性的肿瘤.

摘要：背景与目的:shRNA技术是近来发展的热点技术之一,但普遍采用的单位点shRNA干扰载体效果并不理想。本研究探讨三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用。方法:构建外源基因DsRed全长载体转染HEK293细胞。针对报告基因DsRed设计4个干扰载体,一个含有3段shRNA,另外3个分别含有此3段中1段shRNA。转染293/DsRed,荧光显微镜观察基因DsRed。应用实时定量PCR(Real-timePCR)和流式细胞仪(FACS)检测4个载体对DsRed基因在mRNA及蛋白水平干扰效应。结果:4个载体对靶基因DsRed在mRNA及蛋白水平均有干扰效应,且含有3段shRNA载体对DsRed基因干扰效率为(89±16)%,显著高于3个只含有1段shRNA载体[(50±23)%,(52±15)%,(55±27)%],差异有显著性(P<0.05)。结论:三位点shRNA干扰载体可以提高对靶基因的干扰效率。