摘要：目的建立一种催化发夹自组装(CHA)联合成簇间隔的短回文重复序列及其关联蛋白12a(CRISPR-Cas12a)的传感技术,用于外泌体源性微小RNA-21(miR-21)的检测并分析其性能。方法选取2023年9—10月在陆军军医大学第一附属医院确诊为乳腺癌的患者8例为乳腺癌组;选取同期健康体检者8名为健康对照组。采用试剂盒提取血浆外泌体及其miR-21。针对miR-21序列设计DNA发夹和CRISPR RNA序列。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光分光光度计验证检测技术可行性。进一步优化发夹浓度、CHA反应时间、Cas12a蛋白浓度和Cas12a蛋白反应时间。在此基础上,检测不同浓度(0、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 nmol/L)的miR-21,收集荧光强度采用一元线性回归方法做线性分析以评价方法学的灵敏度,同时检测不同类型miRNA(miR-31、miR-26a、miR-192、miR-25-3p)及空白对照以评价方法学特异性。采用病例对照研究,用该检测技术和逆转录PCR方法检测乳腺癌组和健康对照组血浆外泌体源性miR-21的相对表达水平以评价其临床样本检测能力。结果应用CHA联合CRISPR-Cas12a技术建立了外泌体源性miR-21的检测方法。该方法检测miR-21的浓度与荧光强度呈良好的线性关系(相关系数为0.9667),线性检测范围为0.1~10.0 nmol/L,检测限为87.81 pmol/L。miR-21的检测荧光强度为450.27±23.96,高于miR-31、miR-26a、miR-192、miR-25-3p和空白对照组(分别为98.89±7.35、98.12±2.07、98.93±2.45、96.66±2.45、82.93±3.54),差异均有统计学意义(P均0.05)。结论建立了CHA联合CRISPR-Cas12a检测外泌体源性miR-21的高灵敏度与高特异性的传感技术,其检测血浆外泌体源性miR-21的结果与逆转录PCR结果一致,可用于乳腺癌患者筛查。

摘要：乡村产业振兴是推动农村经济发展的重要战略。为了培育乡村产业振兴的带头人,培训基地借鉴国际培训领域同行的BOPPPS教学模型,设计了科学有效的培育方案,采用了多种教学方法和手段,如专家讲座、实地考察、案例分析等,帮助“头雁”学员全面了解乡村产业振兴的现状和需求。同时,还通过组织实践活动和项目实施,使“头雁”学员能够将所学知识和技能应用于实际工作中,提高其实践能力和创新能力,为乡村产业振兴提供了有效的人才支持,为乡村经济的发展注入了新的活力。

摘要：参照GenBank登录的猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)基质蛋白(matrix protein,M)基因保守序列设计1对特异性引物和1个TaqMan探针,构建重组质粒作为绝对定量模板,通过优化反应体系及条件建立了检测SIV的荧光定量RT-PCR方法,测试了该方法的特异性、灵敏度及重复性。结果显示,建立的方法与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒和猪乙型脑炎病毒等不存在交叉反应,特异性强;最低检测限度为1.0拷贝/μL,比普通RT-PCR方法灵敏10倍;组内和组间重复性试验的变异系数分别在2.2%和1.9%以下,重复性较好;应用该方法对220份临床疑似猪流感样品进行检测,荧光定量RTPCR方法和普通RT-PCR检测率分别为2.7%和1.8%,阳性符合率为100%。结果表明,建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可快速检测样品中的各种SIV,从而更好地诊断和监测猪流感。

摘要：根据猪轮状病毒VP6基因序列保守区设计特异性探针和引物,建立一种特异、灵敏、通用、高效检测Po RV的实时荧光定量RT-PCR检测方法。扩增目的片段为173 bp,以构建的重组质粒p MD19-T-VP6为模板进行反应程序的优化。结果显示,该方法的标准曲线为y=-3.1139x+39.298,R^(2)=0.9937,E=109.5%;用该方法检测猪常发传染病病原时结果均为阴性;对标准品质粒的最低检测限为1.32 copies/μL;批内、批间变异系数分别小于0.600%、1.300%,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。利用该方法检测114份临床腹泻病料,阳性检出率(39/114)优于常规RT-PCR(22/114),39份阳性样品经测序鉴定均为Po RV,扩增VP7基因后成功构建22份阳性质粒,测序结果显示共检出6种G型Po RV,检出率依次为9.09%(G3)、22.72%(G4)、18.18%(G5)、31.82%(G9)、4.54%(G11)、9.09%(G26)。上述结果表明,本试验建立了一种快捷、准确检出Po RV的Taq Man探针通用型实时荧光定量RT-PCR方法,对该病的诊断、病原监测、流行病学调查具有重要意义。

摘要：我觉得人总会遇到各种事情,时间会治愈他们。——《咖啡公社》Wutopia Lab设计的上海历史博物馆满坡栗咖啡馆,于2023年2月在博物馆西楼一楼落成开放。咖啡,上海上海有世界上最多的咖啡馆,可以找到日式、韩式、美式、台式或者东南亚的咖啡馆.

摘要：为解决克氏原螯虾苗种规模化供应短缺问题,以洪泽湖地区克氏原螯虾为研究对象,在研究、掌握本地区克氏原螯虾繁殖习性的基础上,设计并建设了由700m2大棚产卵池和50m2加温孵化温室及若干特制网箱组成的苗种规模化繁育设施。2007年9月分批次将16443只成熟的克氏原螯虾亲虾放入大棚产卵池特制网箱,通过降低光照、微孔增氧、循环流水等措施,先后获得抱卵虾6053只,平均抱卵率为45.7%;抱卵虾移入温室后,在控温、流水条件下孵化,获得了平均体长0.88cm的稚虾76.9万尾,平均孵化率为81.1%。