摘要：本文分析了Mooc及其微课的自身特征,借鉴Mooc理念的课程运行模式,尝试设计了校本微课资源平台的总体架构,详细设计了平台的各个模块功能与运行流程,试图建设校本网络资源辅助教学平台,使得信息技术在高校教学中得以深入应用。

摘要：目的通过基因克隆和体外转录,获得H5N1禽流感病毒抗原基因的RNA全长片段,为病原学检测提供阳性定量标准品。方法设计H5N1禽流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)及基质蛋白M(M)的基因克隆引物,RT-PCR从病毒RNA获得相应片段,分别连接至pGEM-T Easy质粒并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,产物用DNase酶处理、纯化后测定浓度,RT-PCR验证。结果获得含H5N1禽流感病毒HA、NA、M全长基因序列的RNA片段,并可准确定量其拷贝数,质量浓度HA为503.9 ng/μL、NA为379.2 ng/μL、M为437.8 ng/μL。结论获得的RNA片段可作为H5N1禽流感病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。

摘要：前酚氧化酶是一种黑色素合成酶，是节肢动物体内的一种重要免疫蛋白。为了克隆中华按蚊Anophelessinensis前酚氧化酶（Prophenoloxidase，PPO）基因部分序列，根据已报道的多种昆虫PPO氨基酸的保守序列设计简并引物，以中华按蚊总RNA为模板进行RT—PCR扩增，目的片段经TA克隆后测序。所得中华按蚊PPO基因（ASPPO）部分序列长597bp，编码199个氨基酸；与几种近缘蚊种的PPO基因序列同源性分别达57％～100％不等。经在线比对，该序列在基因组中分属两个外显子区域，中间含有一个内含子。推导的氨基酸序列含有两个铜离子结合位点，与目标序列相符，表明成功克隆出ASPPO部分序列。所得序列登录GenBank，登录号：JX295575，JX295576。推导的氨基酸序列提交瑞士蛋白质空间构象模拟平台Swiss-model，以冈比亚按蚊免疫相关前酚氧化酶为模板进行空间3D构象模拟，SPDview软件分析拉氏构象图。结果显示拉氏构象得分较高而QMEAN得分较低，近似跨膜蛋白值，提示该该蛋白是否为中华按蚊中肠和血淋巴疟原虫免疫蛋白尚不确定，需进一步研究。

摘要：为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因核酸疫苗的免疫效力,本研究根据已发表的鸡源补体C3d序列,设计并合成在5'端添加编码连接肽(Gly4Ser)2序列的C3d基因。用同尾酶BglⅡ和BamHⅠ构建含有3拷贝C3d与VP2基因融合的重组表达质粒pcDNA-VP2-3C3d。用脂质体法转染BHK21细胞,48 h后,westernblot分析表明,表达的重组蛋白为162 ku;间接免疫荧光试验检测转染细胞中具有特异性荧光。用pcDNA-VP2-3C3d与前期构建的pcDNA-VP2分别免疫2周龄SPF鸡,二免14 d后,间接ELISA法检测IBDV抗体效价,pcDNA-VP2-3C3d组抗体水平显著高于pcDNA-VP2组;MTT法检测鸡脾淋巴细胞增殖活性,pcDNA-VP2-3C3d组免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性显著高于pcDNA-VP2组(p<0.05)。本研究表明C3d可以增强VP2基因免疫诱导的IBDV特异性体液和细胞免疫应答。

摘要：目的通过体外转录获得登革热1-4型病毒保守区基因的RNA片段,为核酸快速检测方法的建立和改进提供阳性定量标准品。方法设计登革热1-4型病毒基因保守区克隆引物,RT-PCR从病毒RNA获得相应片段,分别连接至质粒PGEM-T-easy上并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,用T7 RNA聚合酶进行体外转录,得到固定长度的RNA片段,DNase酶处理后测定浓度,梯度稀释后用RT-PCR验证。结果获得含登革热1-4型病毒靶基因序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为352.6 ng/μl、384.2 ng/μl、457.3 ng/μl、368.7 ng/μl,RT-PCR验证均扩增出相应目的条带。结论获得的RNA片段可作为登革热1-4型病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。

摘要：目的基因多态性已逐渐成为幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)新的研究热点。文中旨在研究临床Hp菌株中cagA、cagM、cagZ、cagⅠ-Ⅱ接点、IS605等cag致病岛(cag pathogenicity island,cagPAI)相关的遗传学位点的多样性分布及其与胃十二指肠疾病的关系。方法参照标准菌株NCTC11638序列设计引物,特异性PCR方法检测253株Hp菌株中,cagA、cagM、cagZ基因、cagⅠ-Ⅱ接点以及IS605等不同遗传学位点的分布情况。结果 253株临床分离的Hp菌株中,cagA基因的检出率为92.5%(234/253);cagM的检出率为86.2%(218/253);cagZ的检出率为66%(167/253);在慢性非萎缩性胃炎、消化性溃疡、胃癌中的检出率差异均无统计学意义(P>0.05)。仅5.1%(13/253)的Hp菌株中可检测到具有西方菌株特征的cagⅠ-Ⅱ接点的存在,提示中国大部分菌株中的cagⅠ-Ⅱ接点存在明显不同于西方菌株的结构形式;含西方菌株连续状态特征的cagPAI在消化性溃疡中13.3%(10/75)的检出率明显高于慢性非萎缩性胃炎中1.4%(2/146)的检出率(P<0.01)。IS605在慢性非萎缩性胃炎中51.4%(75/146)的检出率明显高于消化性溃疡中28%(21/75)的检出率(P<0.01)。结论cagPAI集群的序列结构具有丰富的基因多样性;cagA、cagM、cagZ等遗传学位点单独无一可作为临床Hp菌株的毒力标志;IS605的存在可能影响菌株的毒力发挥;cagⅠ-Ⅱ接点区域可能存在中国或东亚菌株的特征性结构。

摘要：目的通过基因克隆和体外转录,获得H5N1禽流感病毒血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白M(M)基因的RNA片段,为病原学检测提供阳性定量标准品。方法设计H5N1禽流感病毒的HA、NA及M基因全长开放阅读框的克隆引物,提取H5N1禽流感病毒总RNA,用RT-PCR获得相应片段,分别连接至pGEM-Teasy质粒,转化宿主菌XL10-Gold,然后提取阳性克隆的重组质粒DNA,测序鉴定后用限制性核酸内切酶NdeI酶切线性化,用T7RNA聚合酶进行体外转录,产物用DNase酶处理、纯化后测定浓度,用实时荧光定量PCR构建标准曲线进行验证。结果获得含H5N1禽流感病毒HA、NA、M基因全长开放阅读框序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为503.9、379.2、437.8ng/μl。结论获得的RNA片段可作为H5N1禽流感病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。

摘要：本研究的目的是采用荧光定量PCR扩增技术，建立快速检测淡色库蚊CulexpipienspaUens钠离子通道L1014位点击倒抗性（Knockdownresistance，kdr）相关点突变方法，该方法的原理是以突变位点为3’端设计两条特异性上游引物，和一条非特异下游引物组成两对引物平行双管法，用荧光定量PCR扩增快速检测淡色库蚊钠通道L1014F突变的SS，SR，RR3种基因型。用此方法对48个北京淡色库蚊样本进行基因分型，42个样本检测结果与等位基因特异性PCR（AS—PCR）检测结果完全一致，得到ss（TTA／TTA）基因型21个。占50．0％，SR（TTA／TTT）基因型16个，占38．1％，RR（TTT／1W）基因型5个，占11．9％，与测序结果完全一致；另外6个样本检测结果与AS—PCR检测结果不一致，测序显示：TCA（L1014S）、TTC（L1014F）突变备l株，另4株为敏感纯合子。因此，PCRSYBRGREEN扩增灵敏度（93．75％）低于***法（100％），但特异性较高，达100％；分析原因可能是被检测样本引物结合部位多态性较高，影响了引物的结合，而AS—PCR凭经验能完成部分结果的判断。综上所述，用PCRSYBRGREEN扩增技术快速检测淡色库蚊的L1014F基因突变仍是一种值得采纳的等位基因分型方法。