摘要：目的检测串联siRNA对SW480细胞中增殖诱导配体（APRIL）基因的影响。方法设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段（sh644、shl451、shl938、sh2231），分别将其连接至pGenesil-1．1质粒表达载体，形成pGsh644、pGsh1451、pGshl938、pGsh2231单一表达载体，同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联siRNA表达载体。阳离子脂质体法转染至结直肠癌细胞株SW480。实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测SW480细胞中APRILmRNA和蛋白表达水平。结果经酶切和测序鉴定，构建的串联siRNA质粒载体符合要求。几条siRNA均可有效抑制SW480细胞APRIL基因的表达，APRILmRNA的抑制率分别是pGsh644（56．2％）、pGshl451（49．5％）、pGshl938（50．9％）、pGsh2231（49．2％）、pG4（79．3％）。蛋白质表达抑制率分别为pGsh644（56．9％）、pGshl451（48．7％）、pGshl938（50．1％）、pGsh2231（46．4％）、pG4（87．5％）（P〈0．05）。其中以pG4抑制效应最强。结论与传统单一的siRNA表达载体相比，串联siRNA表达载体大大地敲低了结直肠癌细胞株中APRIL基因的表达，为针对结直肠癌APRIL基因的基因治疗提供研究基础。

摘要：目的 制备并筛选靶向鼠结直肠癌细胞株CT-26增殖诱导配体（APRIL）基因小干扰RNA（siRNA）,通过检测APRIL siRNA抑制肠癌细胞生长及迁移等指标,为体内递送APRIL siRNA靶向治疗小鼠结直肠癌原位模型奠定基础.方法 分别设计、合成4种不同位点的APRIL siRNA,同时以合成无序序列作为阴性对照,再用LipofectAMINE 2000转染高表达APRIL的鼠结直肠癌细胞株CT-26,荧光显微镜下计数评价6-FAM标记的APRIL siRNA转染效率与筛选转染浓度 FQ-RT-PCR检测APRIL mRNA水平,Western印迹分析APRIL蛋白表达,筛选沉默效率最高的APRIL siRNA片段 细胞损伤修复法检测APRIL siRNA抑制肠癌细胞迁移的能力 CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞增殖情况 RT-PCR检测基质金属蛋白酶MMP-2及TIMP-1 mRNA水平.结果 4种不同siRNA瞬时转染CT-26细胞后APRIL mRNA和蛋白表达有明显差别（P＜0.05）.APRIL siRNA组与对照组相比,细胞生长与迁移能力明显减弱（P＜0.05）,MMP-2及TIMP-1 mRNA水平均有显著性差别（P＜0.05）.结论 成功筛选靶向鼠结肠癌细胞株CT-26增殖诱导配体APRIL siRNA,其中APsi737敲低效率可达到90%.靶向APRIL基因小干扰RNA可有效降低肠癌细胞的生长与转移能力,可能与MMP-2及TIMP-1的调节有关.可用于后续的靶向治疗结直肠癌研究.