摘要：目的　构建特异性抑制信号转导与转录激活因子3(STAT3)的小干扰RNA(siRNA)表达载体并检测其对STAT3表达及PC 3细胞增殖的抑制作用。方法　设计、合成STAT3特异性的短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到pSilencerTM2.1 U6载体中,构建STAT3特异siRNA的表达载体,HindIII和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染PC 3细胞,G418筛选出稳定表达细胞株,半定量反转录聚合酶链反应(RT PCR)方法和免疫印迹法检测STAT3mRNA和蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性。结果　经双酶切与测序鉴定成功构建STAT3 siRNA表达载体,转染前列腺癌细胞株PC 3可显著抑制细胞中STAT3mRNA和蛋白的表达水平(抑制率分别为52.4% 及50.5% ),且细胞增殖活性亦较未转染PC 3细胞显著降低(p<0.05)。结论　运用pSilencerTM2.1 U6载体构建的STAT3 siRNA表达载体可有效抑制STAT3的表达及前列腺癌细胞的增殖。

摘要：随着社会安全意识的提高,政府、企业集团客户视频监控传输类需求呈现快速的上升趋势,尽管视频传输业务在有线通信资源满足的条件下已经有较为成熟的解决方案,但是在无法铺设有线管道或现有管线资源无法满足的场景如河坝、山区等仍然面临很大的设计实施困难,尚未形成有效的解决措施。针对以上问题,结合TD-LTE无线通信的传输特点,研究了通过TD-LTE无线通信方式实现集团客户视频传输业务的方法,并结合TD-LTE无线通信的特点给出了相应的解决方案。

摘要：目的探讨靶向小干扰RNA表达框架(SEC)对舌癌细胞内源性人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)的特异性抑制作用。方法利用两步法PCR技术构建多条SEC,采用第5代聚酰胺-胺型树枝状高聚物(G5 PAMAM-D)纳米微球介导SEC转染Tca8113细胞,应用实时荧光定量RT-PCR技术和Western-blot等检测内源性hTERT的表达水平,并进一步筛选出最有效的小干扰RNA靶序列。结果针对不同靶位点设计的SEC干扰效果有显著差异,SEC-A的干扰效果最强,并且能以高度序列特异性方式沉默hTERT基因的表达;此外,转染次数与载体理化特性亦可影响SEC的干扰效应(P<0．05)。结论RNA干扰效应主要取决于靶序列;G5 PAMAM-D纳米载体能够介导SEC-A高效抑制内源性hTERT基因的表达;hTERT基因有望成为舌癌基因治疗的理想靶点。

摘要：目的利用荧光定量PCR技术,研制适合各层次实验室使用的,快速、准确地检测鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列,设计并合成特异性引物和荧光标记探针,将扩增后的特异片断制成阳性模板,绘制标准曲线。以副溶血弧菌菌株8株及同源、非同源参考菌株24株,做特异性检测;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本,做敏感性检测。同时使用PE7000型定量PCR仪和国产DA620微量荧光检测仪检测。结果该方法有良好的特异性:8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其它24株菌株均为阴性(其中8株是弧菌科,16株分别来自不同的菌属);该方法有良好的敏感性:阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间相关系数达到0.9871。在纯培养的条件下,其检测低限为10cfuml。对32个模拟样本直接进行定量检测,则检测低限在102cfug;经过24小时增菌培养,检测低限可达2cfug。结论该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,能避免常规PCR方法易污染的缺陷,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性,便于基层实验室使用,具有很好的推广应用前景。

摘要：目的利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制白血病细胞系K562细胞中c鄄Myc基因的表达,为研究c鄄Myc基因在K562细胞中的作用提供一个新的方法。方法设计c鄄Myc基因特异性小分子干扰RNA,用体外转录方法合成c鄄Myc基因的小分子干扰RNA并转染K562细胞,培养48h后,收集细胞,应用实时荧光定量RT鄄PCR和westernblot方法检测转染细胞中c鄄Myc基因mRNA水平和蛋白表达量的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性。结果转染siRNA后,与对照组相比,实验组c鄄MycmRNA水平和蛋白表达量明显降低,抑制率分别为82.16%和74.0%,MTT法表明实验组的增殖速率明显低于对照组的增殖速率。结论在K562细胞中存在RNA干扰的机制,特异性siRNA能够有效的抑制c鄄Myc基因的表达,为研究c鄄Myc基因在肿瘤细胞中的调节途径提供了一个新的方法。

摘要：目的利用荧光定量PCR技术,建立食品中副溶血弧菌污染的快速、准确的定量检测方法。方法根据副溶血弧菌gyrase基因序列设计合成副溶血弧菌FQ-PCR诊断试剂盒,研究其灵敏度、特异性,并应用于模拟食品样本检测。结果在31株不同菌株的检测中,8株副溶血弧菌结果均为阳性,而其他23株弧菌科及其他菌属的菌株均为阴性;纯菌条件下定量检测低限10 cfu/ml;对模拟样本直接进行,检测低限为103cfu/g,经培养增菌后,检测低限则达到2 cfu/g。结论该方法特异性强、敏感性高,操作简便快速,检验周期仅需36 h,扩增与检测在封闭单管进行,可避免常规PCR方法易污染缺陷,具有很好的推广应用前景。

摘要：目的　建立利用小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制白血病细胞系K562细胞中端粒酶活性的方法,为肿瘤的基因治疗提供理论依据。方法　设计端粒酶逆转录酶(hTERT)基因特异性siRNA,用体外转录方法合成hTERT基因的siRNA并转染K562细胞,培养48小时后,收集细胞,应用实时荧光定量RT PCR和westernblot方法检测转染细胞中hTERT基因mRNA水平和蛋白表达量的变化,并运用TRAPELISA方法检测细胞内端粒酶活性的变化。结果　转染siRNA后,与对照组相比,实验组hTERTmRNA水平和蛋白表达量明显降低,抑制率分别为75%和60%,同时TRAPELISA方法检测发现实验组端粒酶活性仅为对照组活性的45%。结论　hTERTsiRNA能特异性的抑制hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,因此运用siRNA来抑制hTERT的表达可达到降低端粒酶活性的效果。

摘要：分析"高级消防"培训中存在的对课程重要性认识不足、培养计划不合理、高级消防培训与公约要求存在差距、现有考核方式难以评估学员的适任能力等问题,从提升对"高级消防"培训的认识水平、科学设计培养计划、提升履约水平、改进考核评估方式等方面提出提高"高级消防"培训教学水平的建议。

摘要：〔目的〕采用荧光定量PCR技术 ,研制适合各层次实验室使用的 ,快速、准确地检测与鉴定食品中副溶血弧菌污染的定性、定量检测试剂盒。〔方法〕根据副溶血弧菌gyrase基因序列 ,设计并合成特异性引物和荧光标记探针 ,将扩增后的特异片断制成阳性模板 ,绘制标准曲线。以副溶血弧菌菌株 8株及同源及非同源参考菌株 2 4株 ,做特异性检测 ;将阳性污染菌按梯度加入阴性样品为模拟样本 ,做敏感性检测。同时使用PE70 0 0型定量PCR仪和国产DA6 2 0微量荧光检测仪检测。〔结果〕该方法有良好的特异性 :8株副溶血弧菌结果均为阳性 ,而其他 2 4株菌株均为阴性 (其中 8株是弧菌科 ,其它 15株分别来自不同的菌属 ) ;该方法有良好的敏感性 :阳性模板浓度与定量曲线循环阈值之间具有良好的线性关系 ,相关系数达到 0 .9871。直接进行定量检测 ,则检测低限在 10 2cfu/g;经过 2 4小时增菌培养 ,检测低限可达 2cfu/g。〔结论〕该方法特异性强、敏感性高 ,操作简便快速 ,能避免常规PCR方法易污染的缺陷 ,在国产仪器上测试同样取得较好的敏感性和特异性 ,便于基层实验室使用 ,具有很好的推广应用前景。

摘要：[目的]研制一种供基层疾病控制和口岸检疫单位日常疫情监测使用的对水产品、食品、外环境水中的O1群、O139群和非01群、非O139群霍乱弧菌都可进行筛检的实时荧光PCR快速检测方法及其通用试剂体系。以早期进行流行株的鉴定,分析外环境疫情变化。[方法]针对霍乱弧菌溶血素基因(hly)设计引物和探针,取标准O1、O139、非O1非O139群霍乱菌种各10株,其他肠道菌种21株同时做荧光PCR测试其特异性;用标准菌株系列稀释敏感度测试、实际样品稀释染菌敏感度测试、实际样品不经增菌直接检测低限实验、实际样品经过夜培养增菌检测低限实验等测试其敏感性;通过日常实际样品对方法的应用和实验室间验证考察其符合性。[结果]实验与对照菌株51株只有霍乱弧菌产生S型扩增荧光曲线,其它同源和非同源菌株均未产生S型荧光扩增曲线,设计的引物探针具有强特异性;通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系直接检测染菌样本的检测低限为103cfu/mL;对染菌样本经过夜培养增菌检测低限分别在:霍乱弧菌O1群为2.1cfu/g、霍乱弧菌O139群为1.4cfu/g、霍乱弧菌非O1非O139群为3.4cfu/g;实际样本检测252例阳性检出情况与常规方法一致。实验室间验证结果同实验一致。[结论]研制的通用霍乱弧菌实时荧光PCR试剂体系具有快速、准确、实用、敏感性强的优点,值得在各检测部门推广应用。