摘要：为了提高籼稻红莲型保持系粤泰B（YTB）成熟胚愈伤组织再生频率和遗传转化效率,利用培养基种类、菌液浓度、侵染方法、共培养方法、愈伤组织干燥处理方法、筛选剂浓度等6个方面设计农杆菌不同的培养条件进行试验。结果表明：LB和YEB培养基都可以作为农杆菌的培养方法;真空负压处理可以明显提高转化率;共培养时在共培养基上加滤纸有利于后续的除菌工作,能够提高转化效率;愈伤组织经过适当的干燥处理可以明显提高转化效率;适宜的潮霉素浓度在40-50mg/L之间;采用V型筛选的方法,可以使转基因植株的阳性率有所提高。总之,通过对农杆菌培养条件的优化能有效地提高农杆菌介导的籼稻成熟胚愈伤组织再生频率。

摘要：水稻P450基因家族成员CYP81A6参与稻瘟病抗性反应,为了深入研究该基因的功能,本研究利用3次克隆的策略构建了该基因的RNAi载体。首先设计带有酶切位点的基因特异性引物,以c DNA为模板扩增3'非翻译区的特异片断,将目的产物连接到T载体上,经菌落PCR和酶切鉴定后进行测序。测序结果表示,目的片断已正确克隆到T载体上。然后利用双酶切通过2次亚克隆将目的片断以反向重复克隆到RNAi载体ds1301,通过分子检测表明,CYP81A6的RNAi载体构建成功,有助于后续的基因功能和作用机理的研究。

摘要：根据水稻基因组文库日本晴的基因组VDAC基因的序列,设计引物分别扩增6种不同基因组的野生稻(BB、CC、BBCC及CCDD)和2种栽培稻(AA)的基因组DNA的VDAC基因片段。所有分别代表8个VDAC基因的8对引物中,除引物VDAC3外,其它7对引物均能扩增出预期大小的特异条带,其中一些片段是所有试验材料共有的,而另一些则具有明显的基因组或种的特异性。AA、BB、CC基因组均具有VDAC1、VDAC4、VDAC7和VDAC8引物的扩增位点,而DD基因组则不能确定。VDAC6的引物位点是AA基因组所特有。VDAC2引物的扩增位点存在于基因组AA、BB、DD,而CC基因组中则无此位点。而VDAC5则可区分同为CCDD的宽叶野生稻和高秆野生稻。栽培稻种与野生稻种基因组相比能扩增出更多的VDAC基因片段的试验结果,为进一步研究稻属中VDAC基因的起源及进化关系提供了基础。

摘要：红莲型水稻恢复系9311中有2个红莲型恢复基因Rf5和Rf6,不育系YTA中有2个不育基因orfH79和orf216;为了研究2个恢复基因与2个不育基因之间的互作关系,将红莲型水稻不育系YTA与恢复系9311杂交,杂种后代再以YTA为轮回亲本回交8代;根据Rf5基因序列设计特异分子标记,并对L-Rf5进行检测,结合花粉镜检结果,筛选出只含Rf5的纯合株系,多代自交后其表型一致,说明纯合株系L-Rf5构建成功;对近等基因恢复系的不育基因orfH79和orf216的表达量进行分析,结果显示:L-Rf5中orfH79的表达量较YTA明显下降;纯合的L-Rf5比杂合的L-Rf5不育基因orfH79的表达量稍低;L-Rf5中orf216的表达量较YTA下降并不明显。同时克隆了YTA、9311、近等基因恢复系中Rf1B序列,发现它们之间没有差异。

摘要：为了挖掘野生稻中的抗病资源,根据已克隆的植物抗病基因核苷酸结合位点序列中的保守结构域设计3对简并引物,从疣粒、药用、高秆、宽叶和斑点野生稻基因组DNA中分离出13条NBS类抗病基因类似物,其中11条具有连续的ORF,具有NBS类R基因的保守基元P-loop、kinas-2、kinas-3a和GLPL。在NCBI上进行同源性搜索发现,其中12条RGAs的核苷酸序列与水稻已知的NBS类R基因具有66%～94%的同源性,与其他植物已知R基因具有67%～84%的同源性;其对应的氨基酸序列与水稻已知的NBS类R基因具有43%～93%的同源性,与其他植物已知R基因具有37%～79%的同源性。另外1条的核苷酸序列与水稻假定的NBS类R基因具有76%的同源性,其氨基酸序列与水稻假定的NBS类R基因具有74%的同源性。根据序列分析结果设计6对不同基因特异性引物,并利用RT-PCR技术进行表达分析,结果表明,RN1BD5、RN1BD10、RN1GG2和RN1YY6均能表达,说明这些片段可能是功能性抗病基因的部分序列;而RN1KY9和RN1GG5没有表达,可能是假基因。

摘要：VDAC(Voltage-dependent anion channel)是位于线粒体外膜上参与细胞质和线粒体膜间物质及能量交换的主要通道,在细胞程序性死亡、能量代谢、物质运输以及信号转导过程中起着重要的作用。前期实验室在水稻基因组中鉴定出8个OsVDAC基因。为研究OsVDAC6的功能,本研究根据水稻OsVDAC6的ORF序列设计引物,将相应编码区克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,通过IPTG诱导Os VDAC6融合蛋白表达,利用Western Blot检测目的蛋白。构建了pM999-OsVDAC6-GFP瞬时表达载体,转化水稻原生质体后用激光共聚焦显微镜观察荧光信号。结果表明OsVDAC6被成功克隆到pET-32a(+)和pM999-GFP载体,0.5mmoL/L IPTG 16℃诱导8 h可大量表达49 kD可溶性目的蛋白,并且Os VDAC6定位于线粒体。本试验结果为进一步研究OsVDAC6的功能提供了科学依据。

摘要：以红莲型水稻不育系粤泰A(YTA)线粒体DNA为模板,在具有细胞质遗传的线粒体特异性片段HL-sp1侧翼各设计3条特异性巢式引物(LSP1﹑LSP2﹑LSP3﹑RSP1﹑RSP2、和RSP3),利用特异性引物和随机引物AD1﹑AD2和AD3,通过热交错PCR(TAIL-PCR)扩增HL-sp1的侧翼序列。通过扩增和序列分析得到了HL-sp1 5′侧翼1 456 bp和3′侧翼2 570 bp的序列。改进后的TAIL-PCR方法为线粒体目的片段的侧翼序列分析提供了一种简单而高效的方法。

摘要：针对分子生物学和基因工程实验课程的特点,以及实验教学中存在的问题,通过优化整合实验内容,并对实验内容进行模块化,强化设计性实验,改革实验教学运行模式和教学方法、完善成绩考核评价体系等方面,对分子生物学和基因工程实验教学进行改革。实践证明:通过改革,有效地提高了学生的实验操作能力、实践能力、综合素质和创新能力。

摘要：根据已知植物病程相关蛋白基因β-1，3-葡聚糖酶基因（PR2）的保守结构域设计2对简并引物，从高杆野生稻基因组DNA中分离出3条防卫基因类似物（defense—genes analogues，DGAs），其中2条具有通读的ORF，另一条提前出现终止密码子。对这3条序列在NCBI上进行同源性搜索发现，在核苷酸水平这3条序列均与水稻的β-1，3-葡聚糖酶基因具有90％～93％的同源性，与已知大麦、小麦、高梁、黑麦、燕麦、玉米等其它植物的β-1，3-葡聚糖酶基因具有69％-81％的同源性。在氨基酸水平与水稻、大麦、小麦、黑麦的β-1，3-葡聚糖酶具有60％～93％的同源性。对具有通读ORF的2条序列RD1-GG6和RD1-GG12进行表达分析，发现经水杨酸（SA）诱导后表达量明显提高。

摘要：为适应遗传学实验教学改革和应对所面临的巨大挑战,需要多种整合来提高教学效果。对教师而言,除了及时更新和补充现代遗传学的知识以外,尤其要重视实验技能培养的3个层次。如何有效地避免简单的验证性实验并将其整合为综合性的大实验,最终启发学生进行自主性实验设计,并在开放实验室中自主完成实验来提高学生分析问题和解决问题的创新性能力是对教师的迫切要求。