摘要：目的设计共济失调毛细血管扩张症突变基因(ATM)反义多核苷酸作用于喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)细胞以减少ATM表达,进而分析在体外其对放射线照射后喉鳞癌细胞凋亡的影响。方法实验分为反义ATM核苷酸(AS-Lipo)、正义ATM核苷酸(Sen-Lipo)、错配ATM核苷酸(Mis-Lipo)、Lipo与Hep-2组。用实时荧光定量PCR对各组Hep-2细胞的ATM mRNA进行分析。转染后18h,各组细胞分别接受0、2、4、6、8Gy照射,24h后计算细胞存活分数(SF)检测Hep-2细胞放射线照射后的生存能力。选择4Gy的照射剂量,用流式细胞仪分析各组Hep-2细胞的凋亡情况。结果 AS-Lipo、Sen-Lipo、Mis-Lipo、Lipo与Hep-2组的ATM mRNA相对表达量以AS-Lipo组最低,为(11.03±2.51)%(P<0.05)。在同等剂量的放射线照射下,AS-Lipo组的SF最低,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测发现,AS-Lipo组的凋亡率为(30.7±1.31)%,高于其他各组(P<0.05)。结论在体外,ATM反义多核苷酸降低了喉鳞癌细胞中ATM mRNA的表达,同时增加了放射线照射后喉鳞癌细胞的凋亡。

摘要：目的:设计反义ATM多核苷酸作用于喉鳞状细胞癌以探讨其对ATM mRNA、蛋白表达的影响。方法:用Westernblot和real-time quantitative PCR对AS-ODNs、Sen-ODNs、Mis-ODNs、lipo与hep-2组的ATM蛋白和ATM mRNA进行分析。结果:AS-ODNs、Sen-ODNs、Mis-ODNs、lipo与hep-2组(对照组)的ATM蛋白及ATM mRNA相对表达量以AS-lipo组最低,分别为(48.14±5.53)%和(11.03±2.51)%,AS组与Sen、Mis、lipo、hep-2组比较有差异(P<0.05)。结论:反义ATM多核苷酸降低了喉鳞状细胞癌细胞中ATM mRNA、蛋白的表达,其可能使喉鳞状细胞癌细胞对放射治疗的敏感性增强。

摘要：目的为了保护喉功能和提高喉鳞癌病人的生活质量,我们设计反义Livin作用于喉鳞状细胞癌来减少Livin表达,分析在体外对喉鳞状细胞癌细胞凋亡的影响。方法用real-time quantitative PCR对AS-ODNs、SenODNs、Mis-ODNs、hep-2组(Control)的Livin mRNA进行分析;用Western blot对AS、Sen、Mis、与hep-2组的Livin蛋白进行分析;用流式细胞仪分析喉癌细胞的凋亡情况。结果AS-ODNs、Sen-ODNs、Mis-ODNs与Control组的Livin mRNA相对表达量以AS-ODNs组最低,为(24.03±7.02)%,AS组与Sen、Mis、Control组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。AS、Sen、Mis与Control组的Livin蛋白相对表达量以AS-ODNs组最低,为(11.65±3.68)%,AS组与Sen、Mis、Control组比较,差异亦有统计学意义(均P<0.05)。将AS、Sen、Mis转染喉鳞状细胞癌细胞,行流式细胞仪检测,结果发现AS组的凋亡率为(36.54±6.04)%,远高于Sen、Mis、Control组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在体外,Livin反义多核苷酸降低了喉鳞状细胞癌中Livin的表达,同时增强了喉鳞状细胞癌细胞的凋亡。

摘要：目的:(1)研究Livin基因在喉癌组织中的表达;(2)设计siRNA沉默喉鳞癌细胞Livin基因,检测其细胞中Livin蛋白表达。方法:(1)采用免疫组织化学MaxVision法染色检测87例喉癌组织,79例癌旁组织及19例转移淋巴结中Livin蛋白的表达情况;(2)用Western blot对SH2-R、SH2-F、NC组的喉鳞癌细胞(hep-2)的Livin蛋白进行分析。结果:(1)喉鳞癌组织中Livin表达阳性率为71. 26%,显著高于癌旁喉组织。TNM分期中Ⅲ+Ⅳ期喉癌阳性表达率为89. 28%,明显高于TNM分期中Ⅰ+Ⅱ期喉癌;在喉鳞癌颈淋巴结转移阳性者Livin阳性表达率高达73. 68%,高于颈淋巴结转移阴性者。(2) SH2-R、SH2-F、NC组的Livin蛋白相对表达量以SH2-R组最低(12. 31±4. 43)%,SH2-R组与SH2-F、NC组比较有统计学意义。结论:Livin基因在喉癌组织中高表达;在体外,siRNA降低了喉鳞状细胞癌中Livin的表达。

摘要：目的探讨凋亡抑制分子bcl-xL表达下调对食管癌细胞化疗敏感性的影响。方法根据人bcl-xL基因序列设计和合成3对小干扰RNA,将其转染于体外培养的人食管癌细胞株Eca-109,通过RT-PCR和Western-blotting检测bcl-xL的表达情况,筛选出对bcl-xL表达抑制作用最强的小干扰RNA,通过MTT法检测小干扰RNA转染细胞和对照细胞在不同浓度顺铂和紫杉醇作用下的细胞增殖抑制率,计算出半数抑制浓度IC50值并进行对比分析。结果食管癌细胞转染靶向bcl-xL的3种小干扰RNA后,bcl-xL mRNA和蛋白表达均显示出不同程度下调,其中siRNA1对癌细胞bcl-xL表达的抑制作用最强。siRNA1转染食管癌细胞后可使顺铂和紫杉醇对癌细胞的IC50值由转染前的(31.4±4.3)μmol/L和(35.3±6.1)μmol/L下降至转染后的(8.4±3.3)μmol/L和(15.1±4.7)μmol/L(P<0.01)。结论小干扰RNA抑制bcl-xL表达可增强食管癌细胞对顺铂和紫杉醇化疗的敏感性。