摘要：目的建立一种灵敏、特异的痕量检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。方法取感染6～8w日本血吸虫的小鼠肝脏,碾磨后沉淀,孵化并利用间接连续离心法富集毛蚴,采用蛋白酶K-苯酚法提取毛蚴基因组DNA。登陆GenBank查询获得日本血吸虫保守序列18S小亚基单位核糖体脱氧核酸(18SrDNA)基因,利用引物设计软件PrimerPremier5.0和Oligo6自主设计一对引物,建立检测日本血吸虫毛蚴的PCR方法。梯度稀释血吸虫毛蚴基因组DNA进行PCR方法的灵敏性试验,设置阴性对照,PCR产物通过电泳鉴定。结果 PCR扩增日本血吸虫毛蚴得到特异性DNA片段,片段长度为463bp,阴性对照组无扩增产物。PCR法可检测出日本血吸虫毛蚴DNA的最低浓度为62.5pg/μL。结论建立的检测日本血吸虫毛蚴PCR方法灵敏、特异,具有一定的预警作用。

摘要：目的建立快速、高效、特异的定量水体中尾蚴的数量和检测水体中日本血吸虫尾蚴残余基因组DNA的方法,来评估水体受日本血吸虫尾蚴污染的程度。方法根据日本血吸虫基因组DNA中的3个多拷贝序列Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、18S小亚基单位核糖体核酸基因(18SrRNA)序列(序列号:AY157226.1)和逆转录转座子SjR2的G55A序列(G55A)(序列号:AF412221.1),设计常规PCR引物和实时定量PCR引物,选取较好的靶序列建立SYBR GreenI实时定量PCR方法,绘制尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线,并对疫水中日本血吸虫尾蚴残余的基因组DNA进行检测。结果尾蚴数的对数与Ct值的标准曲线有良好的线性关系,相关系数r2为0.918 6,重复性良好。结论本方法特异性高,灵敏,可定量水体中尾蚴数,对疫水检测有一定的预警作用。

摘要：目的建立一种先天性肾上腺皮质增生症21-羟化酶缺陷的快速基因检测方法。方法选择中国人群21-羟化酶缺乏症相关基因CYP21A2的突变热点Exon3 Del 8bp、Q318X、R356W、IVS2 A/C>G、I172N、P30L和V281L共7个位点进行巢式PCR。设计上述突变热点的单链延伸引物进行扩增,采用SNaPshot技术对上述7个突变热点进行一次性基因分型检测。结果建立了一套满足质量控制标准的CYP21A2基因快速检测的方法,5例阳性干血片标本患者SNaPshot技术和测序技术的结果完全吻合,有2例复合突变,3例纯合突变,显示SNaPshot技术高度的特异性和灵敏度。结论采用SNaPshot技术检测CYP21A2基因具有高通量、准确、对样本容受性高的特点,便于临床应用。

摘要：目的分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)52型E 6和E 7基因突变位点分布,评估基因突变与宫颈癌及癌前病变的相关性。方法收集2016年1月至2017年5月经HPV DNA检测为HPV 52单独阳性的DNA样本120例。应用Generunner V 3.01软件设计扩增E 6/E 7区域的1对PCR引物和Sanger测序的4条延伸引物。以HPV 52原型(Gen Bank Accession No.X 74481.1)作为参考序列,应用MEGA 5.05软件分析每个样本的碱基序列和蛋白序列的变异;应用SPSS 17.0进行一般线性相关检验和Fisher's检验或者Pearson Chi-square(χ~2)检验,分析E 6和E 7基因突变与宫颈病变的关系。结果在104例样本中,共发现HPV 52 E 6基因的16个突变位点和E 7基因的17个突变位点。HPV 52 E 6和E 7基因中不同突变位点的突变率差异无统计学意义(χ~2=14.829、12.548,P=0.464、0.766)。在HPV 52 E 6和E 7基因的33种突变中,无突变位点的突变率随着宫颈病变等级恶化有升高或降低的趋势(P>0.05)。HPV 52 E 6基因在CIN 1+样本中的突变频率(14.0%)显著低于正常样本中突变频率(34.4%),(OR=0.31,95%CI=0.11~0.85,χ~2=5.500,P=0.019)。E 7基因的突变频率在CIN 1+样本中的突变频率(16.3%)也低于在正常样本中的突变频率(27.9%),但差异无统计学意义(OR=0.50,95%CI=0.19~1.35,χ~2=1.908,P=0.167)。结论在单独感染HPV 52的条件下,E 6基因突变是阻碍宫颈病变和宫颈癌发生发展的因素。

摘要：目的分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)E 6/E 7 mRNA、第二代杂交捕获技术(hybrid Capture,HCⅡ)和薄层液基细胞学技术(thinprep cytology test,TCT)在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)筛查中的效能,选择适宜的分流筛查方案。方法采用病例-对照研究设计,80例CINⅠ^+的病例样本为HCⅡ或TCT筛查阳性并经组织学诊断;132例正常或炎症标本包括:组织学诊断正常或炎症的标本;HCⅡ阴性,TCT阴性且HPV E 6/E 7 mRNA均为阴性的标本。检测方法分别为:TCT进行细胞学检测、用b-DNA技术检测其HPV E 6/E 7 mRNA和用HCⅡ检测HPV DNA。结果在212例正常或宫颈炎和CIN标本中,HCⅡ的阳性率(37.74%)显著高于HPV E 6/E 7 mRNA的阳性率(25.94%)(P0.05)。TCT的检出率高于HPV E 6/E 7mRNA的检出率,但差异无统计学意义(P>0.05)。HPV E 6/E 7 mRNA与HCⅡ的符合率最高,Kappa为0.733,P=0.000;其次为HC II和TCT的符合率,Kappa为0.564,P=0.000;HPV E 6/E 7 mRNA与TCT的符合率,Kappa仅为0.519,P=0.000。并且,在HCⅡ检测结果阳性的67例CINⅠ^+样本中,HPV E 6/E 7 mRNA检测或TCT检测结果皆为阳性。而在HCⅡ阳性的13例正常或炎症样本中,HPVE 6/E 7 mRNA+或TCT结果阳性仅有7例(53.85%)。结论在CINⅠ^+分流筛查方案中,HPV E 6/E 7 mRNA和TCT共同作为HCⅡ阳性分流筛查的方法,可有效降低HCⅡ的假阳性。