摘要：Ⅰ型聚酮合酶(PKSI)的模块型分子结构组织方式非常适合于组合生物合成研究.结构域和模块通过二级组织方式构成了PKSI的催化单元,其它结构多肽则作为"支架".在"支架"上对结构域和模块两个水平进行突变、替换、插入、缺失等基因操作形成重组PKS,可以理性设计并获得复杂多样的新活性或高活性的聚酮化合物.利用PKSI进行组合生物合成以期获得新聚酮化合物的研究迄今已有约25年,但是目前仍不能够对PKS进行完美的理性设计,快速合成目标活性的新聚酮化合物.PKS中的酰基转移酶结构域的研究在PKS的组合生物合成研究中一直发挥着重要作用.本文结合本课题组的研究基础,对AT结构域的结构、功能及在组合生物合成研究中的最新研究成果作以分析总结.

摘要：目的：筛选出能影响配体TRAIL功能的死亡受体DR5来源的反义多肽。方法：依据蛋白质密码理论，编写可按参数要求进行氨基酸序列匹配比对的生物学软件，利用该软件对TRAIL（序列Ⅰ）和DR5（序列Ⅱ）进行比对。寻找两序列间的反义同源盒匹配序列。结合蛋白质和配体-受体复合物的结构信息，进一步理论筛选相互作用区域，合成可能与TRAIL作用的小分子活性肽。采用ELISA结合和竞争实验，分析所合成多肽与TRAIL的结合；在TRAIL诱导细胞凋亡实验中，分析与死亡受体竞争结合TRAIL的程度，观察多肽影响TRAIL介导细胞凋亡的生物活性。结果：经软件初筛选和理论分析，共合成10条多肽。通过ELISA结合实验筛选到一条多肽（命名为“FR-11”），能与TRAIL发生浓度依赖性的特异结合，并能抑制DR5与配体TRAIL的结合。该多肽与TRAIL97～103aa的匹配率大于50％，计算机模拟三维结构显示该序列位于DR5的胞外区，是与TRAIL结合的关键区域。细胞学实验表明：FR-11肽能够抑制TRAIL介导的SW1990细胞和L929细胞的凋亡，这种抑制作用呈FR-11浓度依赖性，而在TRAIL浓度较低时更为明显，提示能抑制TRAIL与死亡受体的结合。结论：根据蛋白质密码理论设计的软件能筛选出影响配体-受体相互作用的功能反义多肽；某些多肽能模拟受体与配体发生结合，具有抑制配体介导的生物活性。

摘要：为考察土壤和海水中Ⅰ型聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因的多样性和差异,本研究自行设计了一套针对PKS基因中酮缩合酶(ketosynthase,KS)片段的简并引物,使用PCR方法直接克隆东海洋山港沿岸土壤和海水DNA样本中的KS片段,去除重复序列后,共获得了23条不同的KS片段(长度为630bp^690bp),提交GenBank皆获登录号,其中19条来自土壤(DQ640993、DQ640997、DQ641926、DQ641927、DQ673137~DQ673151),4条来自海水(DQ673151,EF554859~EF554861),由核苷酸序列推断出的氨基酸序列保守,与GenBank中已知KS基因片段的相似度在45%到85%之间,种系发生分析表明,其中14条KS片段(来源于海水的KS片段皆在其中)应来源于典型的KS群,而剩余9条则来源于杂合的PKS/NRPS(Non-ribosomal peptide synthetase,非核糖体多肽合成酶)群。另外,几条KS基因特征明显,可用于进一步的研究。

摘要：目的研究新型聚酮合酶(PKS)基因簇EF568935(GenBank登录号)中酰基转移酶(AT)EF080951(GenBank登录号)底物特异性,为PKS的功能研究及组合生物合成研究提供新组件。方法从酰基转移酶AT-EF080951结构域两端的连接肽区设计引物,通过PCR克隆其结构域基因at-EF080951;连接入原核表达载体pMAL-c2X,与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合表达;直链淀粉树脂柱亲和层析纯化MBP-AT-EF080951;融合蛋白用Xa因子切除MBP,得到AT-EF080951单体;以MBP、小牛血清白蛋白(BSA)为对照蛋白,用紫外分光光度法测定MBP-AT-EF080951与AT-EF080951对底物的结合能力,计算结合常数(Ka,μmol/L),分析其结合底物的特异性。结果(1)MBP-AT-EF080951与底物的结合常数为:甲基丙二酰辅酶A,0.0049±0.001;丙二酰辅酶A,0.0049±0.003;乙酰辅酶A,0.107±0.002;辅酶A,0.005±0.003。(2)AT-EF080951与底物的结合常数为:甲基丙二酰辅酶A,0.005±0.002;丙二酰辅酶A,0.0041±0.002;乙酰辅酶A,0.120±0.001;辅酶A,0.0042±0.003。结论MBP-AT-EF080951和AT-EF080951都特异性结合乙酰辅酶A,AT-EF080951可能是乙酰转移酶。

摘要：目的 :寻找具有更强抗肿瘤活性和 (或 )较低毒副作用的 TNFα突变蛋白。 方法 :应用巨引物二轮 PCR技术对rh- TNFα的第 80、90和 92位氨基酸编码的密码子进行定点突变 ,经过 DNA序列测定证实 DNA突变准确后 ,将突变基因的c DNA插入 p BL载体 ,转化大肠杆菌 DH5α,获得表达 rh- TNFα- D3a的工程菌。 结果 :经巨引物二轮 PCR获得表达 TNFα突变蛋白的基因突变 ,经序列测定结果与设计一致 ,重组蛋白表达量占细菌总蛋白 18.0 % ,大部分为可溶性 ,占 rh- TNFα- D3a总量的 6 0 %以上。重组蛋白经纯化 ,纯度 >98%。 rh- TNFα- D3a对 L 92 9细胞表现出较高的细胞毒性 ,比活性大于 5× 10 8IU / mg。与野生型的 rh- TNFα相比 ,rh- TNFα- D3a的毒性降低为野生型的 1/ 10 ,同时其保留了 TNFα的抗肿瘤活性。 结论 :rh- TNF-αD3a是一个毒性较低 。

摘要：介绍了分子生物学虚拟实验软件的结构组成、功能及其优势所在。指出虚拟实验室的应用,激发了学生的学习兴趣,提高了分子生物学实验教学效果,提升了学生自主创新能力。

摘要：氨的代谢是氨基酸代谢中的重要教学内容,同时也是临床医学专业相关医学课程内容学习的基础。氨的代谢的教学设计应当更好地结合临床医学专业学员的培养目标和要求。通过合理的设计,充分调动学生的积极性,实现系统化和整体化的教学效果,并把传授生化知识和培养学生临床思维能力有机地结合起来。

摘要：第二军医大学自2009年开始实施以本科生创新能力培养为目的的“校级大学生创新能力培养计划”。通过使本科生参与科研课题的设计与实验操作，撰写科技论文和进行学术交流等形式，提高了学生的创新思维，增强了实践能力和协作精神，实现了研究与教学的统一。

摘要：氨基酸代谢是生化教学中物质代谢章节中的重要内容,也是医学院校临床医学相关专业学习的基础。鉴于氨基酸代谢章节知识点较多,在以往课程中学生较难记忆的特点,本文重点介绍在教授此部分内容时,采用的"三字经"学习法、辩证学习法及转化医学设计。这些方法的设计,可充分调动学生的积极性,实现知识体系的系统化和整体化,便于学生更好地掌握该章节内容。

摘要：现代生物工程综合实验课程是以分子生物学技术为主要教学内容的综合性理论实践课程。当前,军队院校许多课程缺乏“为战育人”的导向性。文章首先从聚焦于战场、贴合海军岗位实际需求的基本要求出发,围绕现代生物工程综合实验课程的自身特点,阐述了新课程体系构建的基本构想;然后,从课程教学内容本身出发,阐述理论教学和实验教学内容的具体设计;最后,围绕“为战育人”的导向,从塑造浓厚的实战化教学氛围、注重知识元素和思政元素的有机统一以及注重多元化教学手段的充分运用这三个方面阐述新课程体系建设和实施的要点。