摘要：目的对Allglo探针和Taqman探针检测GI型和GII型诺如病毒的双重荧光RT-PCR方法进行比较,并应用于临床标本的检测。方法设计针对GI型和GII型诺如病毒的Allglo探针和Taqman探针,优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系。对这两种方法的特异性、灵敏度进行比较评估,对56份临床粪便标本进行检测,并统计结果。结果这两种方法特异性强;最低检测限均为102copies/μL以下;但是Allglo探针在同一浓度下比Taqman探针CT值更低,扩增效率更高。对56份临床粪便标本进行检测,两种方法结果一致。结论 Allglo探针双重荧光RT-PCR方法较之Taqman探针检测GI型和GII型诺如病毒扩增效率更高,两者均可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速筛查。

摘要：以微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)特异性DnaJ-like蛋白基因的保守序列为模板,设计和合成特异性引物和荧光标记探针,通过检测微小隐孢子虫卵囊DNA和加标模拟样品进行敏感性分析,建立标准曲线,并对其特异性和干扰性进行评价。结果显示,该方法只对微小隐孢子虫卵囊进行特异性扩增,其他常见的肠道原虫和肠道病原菌均不能扩增;微小隐孢子虫纯卵囊基因组DNA检测的灵敏度为26个/ml;对加标粪样可检测至2 600个/ml卵囊。提示本研究建立的实时荧光PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法具有快速、特异性和敏感性高等优点。

摘要：目的建立应用Allglo探针同时检测GⅠ和GⅡ型诺如病毒的双重荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法设计针对GⅠ和GⅡ型诺如病毒开放阅读框架ORF1及ORF2为目的基因的引物和Allglo探针,优化最佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系;对该方法的特异性、抗干扰性、灵敏度进行评估,对96份临床粪便标本进行检测、测序分析。结果该方法特异性强,与轮状病毒、扎如病毒、星状病毒、腺病毒同时检测无交叉反应;同一体系下GⅠ或GⅡ型诺如病毒相互之间没有干扰;最低检测限均为10 copies/μL;对96份临床粪便标本进行检测,结果与单重荧光RT-PCR方法符合率100%,且测序结果显示目标序列正确。结论本研究建立的Allglo探针法检测GⅠ和GⅡ型诺如病毒技术特异性好,灵敏度高,可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速筛查。

摘要：目的建立以毒素基因A/B为靶基因的产毒艰难梭菌的快速定量检测方法。方法通过设计艰难梭菌毒素A/B基因的特异引物及探针,建立标准产毒菌株DNA(ng)含量与Ct值的标准曲线。结果该方法仅对产毒艰难梭菌进行特异性扩增,11种其他常见的致病菌及非产毒艰难梭菌均不能扩增;tcdA和tcdB基因扩增标准曲线线性关系R值分别为0.9975、0.9984,检测低限均为2.5×10-3ng。结论该研究建立的方法具有快速、灵敏、特异性高等优点,可用于艰难梭菌毒素基因的定量检测。

摘要：为了获得能够用于猪传染性胃肠炎（TGE）鉴别诊断的抗原蛋白,本研究以猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）山东分离株SD-LY6核衣壳蛋白（N）基因为研究对象,对其进行引物设计并进行RT-PCR扩增,经克隆测序后对N蛋白基因序列进行分析;同时对N蛋白基因进行克隆,构建重组质粒pET-15b-TGEV-N,并进行IPTG诱导表达及纯化,利用SDS-PAGE和Western-blot进行检测。研究表明,TGEV SD-LY6株N蛋白基因序列高度保守,核苷酸以及氨基酸序列同源性均在97. 0%以上;获得了大小约为47 ku的纯化重组N蛋白,该重组N蛋白可以与猪传染性胃肠炎阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性,与无关血清样本无交叉反应,可以作为TGE的诊断抗原,为下一步高效快速诊断方法的研究提供坚实的基础。

摘要：众所周知,食品安全已经成为一个世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题,食品安全检测技术与经济的健康发展有着紧密的联系.随着我国进口食品贸易量快速增长以及消费者对进口食品安全要求日益提高,行业对食品质量安全检测技术、材料及设备提出了更高要求.为此,在江苏省科技计划项目"基于量子点印迹传感器的设计、制备及其对水环境中痕量磺胺类药物的识别性能与机理研究"(项目编号:BK20151323)、南京海关重点研究项目"用于常见生物毒素及动物用药检测的新型化学发光试剂盒的研究与应用"(项目编号:2015KJ25)等支持下,南京海关动植物与食品检测中心联合张家港海关综合技术中心、镇江海关综合技术中心,开展了"食品质量安全检测关键技术创新和新材料新设备集成应用研究".项目聚焦食品检测中最为突出的质量安全关键控制点进行系统研究,以新材料、新设备研发为保障,高通量快速筛选特异指标确证体系为依托,集成运用多谱融合技术进行系统深入的研究,为我国食品的生产、加工以及进口食品的风险控制提供新思路与技术支持.

摘要：目的:建立实时荧光PCR快速检测艰难梭菌的方法。方法:以艰难梭菌磷酸丙糖异构酶(tpi)基因的保守序列为模板设计和合成特异性引物和荧光标记探针,建立实时荧光PCR检测体系,通过检测含有艰难梭菌标准菌株浓度为106-10 CFU/ml的细菌培养物及加标模拟样本进行敏感性分析,并对其特异性和干扰性进行评价。结果:该方法只对艰难梭菌进行特异性扩增,其他常见的病原菌均不能扩增;整个检测过程只需要2 h,对艰难梭菌菌悬液可检测至10 CFU/ml细菌,对加标粪便样本可检测至1000 CFU/ml细菌。结论:本研究建立的实时荧光PCR检测艰难梭菌方法具有快速、特异、敏感性高等优点,能实现对艰难梭菌的快速检测。

摘要：为实现转基因甜菜品系GTSB77的标识管理和精准定量,根据GTSB77的3'端边界序列和甜菜谷氨酰胺合成酶(GS)基因设计引物探针建立双重微滴数字PCR检测方法。结果显示:建立的转基因甜菜GTSB77数字PCR检测方法特异性强,在20μL反应体系中定量下限(LOQ)均为1.84拷贝/μL,检测下限(LOD)均为0.61拷贝/μL,可应用于转基因甜菜GTSB77成分的精确定量检测。

摘要：[目的]为完善我国转基因检测方法体系,建立转基因大豆MON87751品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,PCR)检测方法。[方法]根据MON87751的3′端邻接区序列设计特异性引物和探针,建立MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法,并测定该方法的灵敏度、特异性及可重复性。[结果]灵敏度测试显示,其定量下限为40拷贝;重复性试验显示其相对标准偏差在可接受范围内。[结论]该研究建立的MON87751品系特异性实时荧光PCR检测方法特异性良好,灵敏度高,有良好的可重复性,适合对转基因大豆MON87751品系进行检测鉴定。