摘要：背景与目的:Pim家族是具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的原癌基因,包括Pim-1、Pim-2、Pim-3。研究发现,Pim能够抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,导致肿瘤发生。本研究利用ELISA反应原理建立高通量筛选体系,对Pim抑制剂进行筛选,为药物的应用和解决恶性肿瘤临床治疗的难题提供研究基础。方法:通过计算机辅助药物设计的手段,以蔓生百部碱母核三环酰胺作为核心结构合成系列衍生物;利用Pim重组蛋白和Bad重组蛋白可以与Ni2+特异性结合的亲和层析原理进行重组蛋白的纯化精制;利用ELISA方法,通过Pim激酶磷酸化促凋亡蛋白分子Bad在112位丝氨酸的反应,建立筛选Pim靶向抑制剂的体系。结果:0.01 mmol/L的IPTG在37℃条件下,诱导Bad蛋白2 h,可以获得最大量的可溶性Bad重组蛋白;0.02%的阿拉伯糖在37℃条件下,诱导Pim-1、Pim-2、Pim-3蛋白3 h,可以获得最大量的Pim重组蛋白;ELISA结果显示,Pim激酶与Bad底物之间的作用存在剂量依赖性反应关系,进而成功建立药物筛选体系;初步筛选出低分子化合物T-18,在体外能有效抑制Pim激酶活性。结论:利用ELISA反应原理建立的筛选药物方法,是一种经济、简单、快速、高效、敏感的筛选手段,并初步筛选出小分子化合物T-18,能够抑制Pim激酶活性,阻断Pim对凋亡蛋白分子Bad的磷酸化过程,进而抑制肿瘤的发生。

摘要：2013年10月23日至24日，由住房和城乡建设部住宅产业化促进中心主办、保障性住房建设材料部品采购信息平台与《城市开发》杂志社协办的“2013中国房地产业转型与住宅产业现代化暨绿色建筑新技术新材料发展趋势交流会”在北京国家会议中心如期召开。会议期间，题为“发展绿色建筑，共筑中国明日之家”和“住宅产业现代化与成品住宅发展新趋势”的两个互动论坛将会议推向了高潮。本刊分别摘录了两个论坛的部分观点，以飨读者。

摘要：在之前的研究中,我们寻找并克隆到了一个新的Bim异构体Bimβ5,其转录从开放阅读框的第2个ATG起始,并编码一个包含BH3结构域的36个氨基酸的蛋白质.BH3结构域被认为是Bim蛋白及其他Bcl-2家族蛋白发挥作用的充分必要条件,因此有必要探寻其序列中对Bim蛋白功能起决定作用的核心区域.通过设计并构建基于Bimβ5的开放阅读框的一系列截断体,检测不同截断体的促凋亡能力,最终得到了Bim蛋白发挥功能所需的最短保守序列,即包含17个氨基酸的序列QELRRIGDEFNAYYARR,并将其命名为Bim核心元件.此外,通过对只包含Bim核心元件的截断体Bimβ5A3进行计算机分子建模,进一步揭示了Bim核心元件促凋亡的作用机理.Bim核心元件在介导Bak/Bax形成同源或异源二聚体时发挥着重要作用.

摘要：背景:phiC31是重要的基因治疗工具酶,其与细胞内蛋白的相互作用可能影响细胞内各种通路,从而关系到基因治疗的安全性。目的:构建锌指蛋白403基因原核表达载体,观察其在真核细胞的表达情况。设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-10/2008-12在复旦大学遗传工程国家重点实验室完成。材料:大肠杆菌DH5α菌株及大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株均为实验室保存。方法:用pLexA-phiC31作为"诱饵",对人胎脑cDNA文库通过酵母双杂交进行筛查,分离阳性克隆。对锌指蛋白403基因构建原核表达载体并纯化鉴定。脂质体介导真核细胞进行转染并细胞定位观察。主要观察指标:锌指蛋白403的原核表达载体的构建、纯化及在真核细胞细胞质中定位的结果。结果:酵母双杂交进行筛查后分离61个阳性克隆中,有1个包含17号染色体17q12上的基因序列,其具有一个锌指结构,故名锌指蛋白403。成功构建了锌指蛋白403的原核表达载体,并纯化组氨酸标记的锌指蛋白403。在真核细胞中,构建了绿荧光融合载体,证明了此蛋白在细胞质中的定位。结论:实验结果发现了一个新的phiC31整合酶相互作用蛋白,成功构建了znf403基因的原核表达载体,znf403蛋白主要在细胞质中聚集和分布。