摘要：目的了解山东省疟疾流行区二类县中小学生疟疾防治知识知晓情况,为制定疟疾防治措施提供依据。方法采用横断面调查方法,统一设计调查问卷,调查山东省5个二类县中小学生疟疾防治知识知晓情况。结果共调查中小学生1 884人,疟疾防治知识总体知晓率为65.9%,其中54.7%的学生知晓疟疾的传播途径,31.5%的学生知道预防疟疾的有效方法。不同疟疾流行区学生疟疾防治知识得分差异有统计学意义(F=172.245,P0.05)。结论山东省中小学生疟疾防治知识知晓率尚处于较低水平,应加强中小学生疟疾防治知识健康教育的力度。

摘要：目的了解山东省输入性恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)抗药性相关基因(Pfcrt、Pfmdr1、Pfdhfr和K13)的突变情况。方法采集山东省2014年自非洲劳务返乡的94例输入性恶性疟患者血样,提取血样中恶性疟原虫基因组DNA,分别根据恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr1、Pfdhfr和K13基因序列设计引物,进行巢式PCR扩增和测序,并对测序结果进行序列比对分析各基因的突变情况。结果94例输入性恶性疟患者自18个非洲国家劳务返乡。提取94份患者血样中的恶性疟原虫基因组DNA,除1份血样的DNA Pfcrt基因PCR扩增失败外,其余均扩增成功,并测序。结果显示,94份患者血样的恶性疟原虫Pfcrt基因K76T突变型、Pfmdr1基因N86Y突变型和Pfdhfr基因S108N突变型分别占36.6%(34/93)、21.3%(20/94)和98.9%(93/94),3种基因的突变型所占比例的差异有统计学意义(χ2=127.5,P<0.05)。未检测到K13基因C580Y的突变。6份患者血样(占6.5%)的恶性疟原虫同时携带K76T、N86Y和S108N突变,其中2例自利比里亚输入,4例分别自安哥拉、赤道几内亚、刚果和几内亚输入;28份血样(占30.1%)的恶性疟原虫同时携带K76T和S108N突变,14份血样(占15.1%)同时携带N86Y和S108N突变;44份血样(占47.3%)的恶性疟原虫仅携带S108N突变;1份血样的恶性疟原虫3个基因均未发生突变。结论 2014年山东省输入性恶性疟原虫Pfcrt、Pfmdr1和Pfdhfr基因均有不同程度的突变,其中Pfdhfr基因的S108N突变型所占比例最高,未检测到K13基因的突变。

摘要：目的分析山东省间日疟原虫MSP-1和CSP基因类型及其同源性,为病例溯源提供科学依据。方法采集2011年山东省报告的12例间日疟患者血样,提取疟原虫基因组DNA;分别根据间日疟原虫MSP-1和CSP基因序列设计引物,进行巢式PCR扩增、酶切、测序、序列比对及同源性分析。结果 12份间日疟患者血样MSP-1基因全部出现470bp扩增条带以及350、120 bp酶切片段,均为Sal-1型;MSP-1进化树分析显示,9份省内感染者样品序列同属一个分枝,1份印度感染者样品序列与印度分离株位于同一分枝。12份间日疟患者样品CSP基因均包含GDRA(D/A)GQPA序列,为PV-Ⅰ型,其中10份省内感染者和1份广东感染者样品CSP基因出现560~840 bp和150~230 bp两种扩增条带,为PV-Ⅰ型温带族,1份在印度感染者样品CSP基因仅出现560~840 bp条带,为PV-Ⅰ型热带族。CSP进化树表明,10份省内感染者及1份广东感染者样品序列同属一个分枝,1份在印度感染者样品序列与印度和印度尼西亚分离株位于同一分枝。结论山东省本地感染间日疟原虫MSP-1基因型均为Sal-1型,CSP基因型均为PV-Ⅰ型温带族,本地虫株具有较强的基因同源性。

摘要：目的了解目前山东省输入性恶性疟原虫抗药性基因Pfcrt和Pfmdr1的单倍型,分析突变基因型及其分布情况。方法根据恶性疟原虫Pfcrt和Pfmdr1基因序列设计套式PCR引物,对采自全省非洲务工返乡的输入性恶性疟感染者血样扩增,并对其产物进行基因测序和序列对比分析。结果 68例样本Pfcrt基因第72~76位点和Pfmdr1基因第86、1 042和1 246位点目的片段全部成功扩增和测序。Pfcrt基因中69.12%为野生单倍型CVMNK,30.88%为突变单倍型,突变型包括CVIET、CVIDT及混合型,其中CVIET数量最多。Pfmdr1基因中69.12%为野生单倍型NND,30.88%为突变单倍型,即YND及混合基因型。6个非洲输入来源国样本中,除几内亚Pfcrt基因全部为野生型外,其它国家Pfcrt和Pfmdr1基因均有突变型存在。5例样本Pfcrt和Pfmdr1基因共同表现为突变单倍型。结论山东省输入性恶性疟Pfcrt和Pfmdr1基因突变单倍型具有多样化特征。Pfcrt和Pfmdr1突变型比例均低于野生型,提示目前该省流行的输入性恶性疟未出现严重的氯喹耐药性。

摘要：目的比较疟疾病例样本套式PCR检测和传统镜检结果,探讨套式PCR在疟疾诊断中的应用价值。方法采集疟疾患者血样,分别涂制厚、薄血膜用于常规镜检;抗凝血或滤纸血用于提取疟原虫DNA等。按要求设计属种等多套引物,应用套式PCR扩增感染人的4种疟原虫目的基因片段,将检测结果与镜检结果进行比较分析,并对目的片段进行测序鉴定等。结果 259份血样,套式PCR共检测出恶性疟187例、间日疟45例、卵形疟8例和三日疟1例,阴性10例。其中恶性疟阳性检出率最高(75.10%),间日疟阳性检出率次之(18.07%),还检测到混合感染血样8份(3.21%)。与Gen Bank标准序列对比显示,扩增片段大小及测序结果均完全正确,显示套式PCR在分型上比传统镜检更客观。套式PCR检测与传统镜检结果比较显示,前者阳性率(96.14%)明显高于后者(90.73%),并且差异具有统计学意义(χ2=12.07,P<0.05)。结论套式PCR法检测疟原虫具有较高敏感性和特异性,且适用于疟原虫混合感染,在疟疾病例诊断和分型方面均具有良好的应用前景。

摘要：目的研究廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2基因片段,克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备抗弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗。应用该疫苗免疫小鼠,通过ELISA检测血清抗体,Western blot鉴定该疫苗的免疫原性;应用RH株弓形虫进行动物攻击实验,评价其安全性及免疫保护性。结果以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7 kb ROP2基因片段,克隆于pc-DNA3质粒中,成功构建了pc-DNA3-ROP2重组质粒。测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白。应用该疫苗免疫小鼠,能诱导产生强烈的细胞、体液免疫反应,使实验组小鼠攻虫感染后的存活时间明显延长,攻虫感染192 h后的存活率为77.8%,空质粒及PBS对照组存活率为0,差异有统计学意义(P<0.001);实验全程免疫小鼠未发生毒性及异常反应。结论该核酸疫苗具有很强的免疫原性,安全可靠,能诱导小鼠产生良好的免疫保护作用,具有很好的开发应用价值。