摘要：目的构建Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)ADA株包膜蛋白(gp140)真核表达载体。方法分别设计包膜蛋白和突变点两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,构建HIV-1ADA株包膜蛋白gp140突变体。获得的PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌后筛选阳性克隆进行测序,鉴定正确后经EcoRⅠ和NheⅠ双酶切,与pcDNA6/myc-HisA载体连接,构建包膜蛋白gp140的真核表达载体(pcDNA6-ADAgp140),转化大肠杆菌后筛选阳性克隆,经PCR及酶切进行鉴定。结果获得HIV-1ADAgp140的PCR产物,构建了其真核表达载体pcDNA6-ADAgp140,经转化和筛选获得了重组菌,经PCR、酶切及基因测序结果显示序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了ADAgp140包膜蛋白的真核表达载体。此结果为深入研究HIV包膜蛋白生物学特性及进行HIV疫苗研究提供了良好的物质基础。

摘要：目的探索1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白修饰对包膜免疫原性的的影响。方法通过PCR扩增获得原代HIV-106044株包膜gp120基因及其突变体gp120／W427S基因，并构建gp120三聚体蛋白真核表达载体pcT—gp120和pcT—gp120／W427S，重组表达载体体外瞬时转染人胚肾HEK293T细胞，表达gp120三聚体蛋白。采取DNA初免-蛋白凝胶加强的策略免疫BALB／c小鼠，末次免疫后10d检测免疫血清中结合抗体的水平。结果获得真核表达载体pcT—gp120和pcT—gp120／W427S及gp120三聚体蛋白；末次免疫后10d，gp120免疫血清中结合抗体滴度大于1：1000，gp120／W427S免疫血清中结合抗体滴度大于1：10000，而且，gp120／W427S免疫组血清抗体结合活性显著高于gp120免疫组血清。结论HIV-1包膜第427位色氨酸突变为丝氨酸，改善了包膜的免疫原性，为包膜免疫原的设计和优化提供了新的线索。

摘要：获得性免疫缺陷综合症(acquired immune deficiency syndrome,AIDS)是由I型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type I,HIV-1)感染引起的一类疾病。HIV-1在全球范围广泛传播,破坏免疫系统,一旦感染终身带毒,致死率高。在已经完成的Ⅲ期HIV-1疫苗效力试验中,RV144是唯一显示出免疫保护效果的疫苗,且免疫保护效果与HIV-1病毒包膜gp120 V1V2区域的抗体相关。HIV-1包膜V1V2的氨基酸序列及结构赋予病毒重要功能,包括进入靶细胞、诱导广泛交叉中和抗体及与α4β7整合素分子的相互作用等。根据V1V2结构域特征设计免疫原是研制疫苗的重要策略。现就HIV-1包膜V1V2区结构特征、中和表位及疫苗的研究进展作综述。