摘要：用蚀斑法滴定病毒是确定感染病毒颗粒存在数量的一种较准确方法。本实验表明，痘苗病毒吸附4h后仍有大量病毒粒子未能吸附到细胞单层，进而测定出病毒接种量、维持液加量和所测病毒滴度间具有一种互为消长的非线性相关性。因而设计了几种检测方法，其准确性均优于常规痘苗病毒蚀斑测定法。利用装配有Mathematic软件包的计算机在痘苗病毒接种量、维持液加量和所测病毒滴度间建立了曲线拟合模型和曲面拟合模型。通过曲线拟合模型推断病毒感染滴度为常规法滴定值的近5倍。

摘要：目的研究小分子干扰RNA(siRNA)对狂犬病病毒(RV)不同毒株复制的交叉抑制效果。方法采用体外转录和RNA酶III消化长片段双链RNA的方法制备8条以RV的PV株核蛋白(N)基因为靶基因的21ntsiRNA,用以转染已经感染了不同滴度PV、CTN或CVS株RV的BSR细胞,采用直接免疫荧光法观察转染的siRNA对已感染BSR细胞的不同毒株RV复制的抑制效果,并分析这种抑制效果与靶基因序列的相关性。结果不同21ntsiRNA均对PV株的复制产生了较强的抑制作用;对CTN株和CVS株的交叉抑制作用观察结果表明,21ntsiRNA与靶基因在碱基错配高达5个的情况下仍对病毒复制保持抑制效应。然而,siRNA与靶基因碱基错配的位置与抑制作用的丧失高度相关。3’端第2个碱基的错配将使抑制作用表失,随后的碱基错配对抑制作用的影响依次降低;中部碱基错配影响较小;而5’端碱基错配对抑制作用几乎没有影响。结论siRNA对靶基因的抑制作用的丧失与其同靶基因序列碱基错配的位置相关,3’端碱基错配可降低其抑制作用的特异性,产生偏靶效应的范围和概率可能增大,这为设计独特的siRNA序列提供了新的思路。